己酮可可碱对人精子功能影响的体外实验研究

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1、山西医科大学焉士学位论文己酮可可碱对人精子功能影响的体外实验研究摘要目的：研究不同浓度下的己酮可可碱(Pentoxifylline，PF)体外对人精子活力、活率、运动功能、精子膜功能完整性、精子顶体反应、精子细胞内电压依赖性钙离子浓度的影响，探讨发生项体反应的相关机制。方法：30名健康、具有生育能力的男性，手淫法取得全部精液标本。第一部分，将终浓度为4mmol／L、8mmol／L、16mmol／L的PF在体外与经上游优化处理的正常生育男性的精子分别共同孵育，同时设立正常对照组，于30和60分钟时对它们分别进行精液常规分析。第二部分，对第一部

2、分60分钟时的各组精液分别进行低渗肿胀(HOS)试验。第三部分，正常生育男性的精子经上游优化处理后，诱导精子获能，将终浓度为4mmol／L、8mmol／L、16mmol／L的PF与获能精子孵育60分钟，同时设立正常对照组，然后诱发精子发生顶体反应，用特异性荧光标记物——络合异硫氰酸荧光素的豌豆凝集素(FrrC．PSA)标记顶体，通过流式细胞仪检测顶体的完整性。第四部分，正常生育男性的精子经上游优化处理后，将终浓度为4mmol／L、8mmol／L、16mmol／L的PF在体外与之分别共同孵育，同时设立正常对照组，于30分钟时用Fura-3／A

3、M标记精子细胞内电压依赖性钙离子，用RF-540荧光分光光度计测定精子细胞内电压依赖性钙离子的荧光强度。结果；1)第一部分，与对照组相比，4mmol／L组、8mmol／L组、16mmol／L组的活力、活率均有明显差异(P<0．05)，并且曲线速度(VCL)、直线速度(VSL)、平均路径速度(yAP)、平均移动角度(MAD)、侧摆幅度(ALH)、摆动性(WOB)均有明显差异口<0．05)；与对照组相比Ammol／L组、8mmol／L组、16mmol／L组的鞭打频率(BcF)、直线性(uN)和前向性(STR)无明显差异(P>0．05)。表明随着

4、PF浓度的升高和孵育时间的延长，精子活力、活率、精子运动能力仍能保持高活性的趋势。2)第二部分，对照组、4mmol／L组、8mmol／L组、16mmol／L组的精子g形精子百分率、尾部总肿胀率无明显差异(P>0．05)。表明随着PF浓度的升高，PF对精子膜功能的完整性没有影响。3)第三部分，终浓度为16mmol／L组的精子，顶体标记荧光值明显高于对照组和其他实验组，差异具有显著性口<0．05)。对照组、4mmol／L组、8mmol／L组之间无显著性差异if,>0．05)。表明终浓度为16mmol／L的PF能诱导精子发生顶体反应。4)第四部分

5、，加入PF终浓度为16mmol／L组的精子，细胞内Ca2+荧光差值均明显高于对照组、4mmol／L组、8mmol／L组，差异具有显著性(P<0．05)。对照组、4mmol／L组、8mmol／L组之间精子细胞内Ca2+荧光值依次升高，但无显著性差异。表明PF诱导精子发生顶体反应的机制与精子细胞内Ca2+浓度升高有关。结论：在精子的体外实验中，不同浓度的PF均可促进人精子的活力和活率，提高精子的运动功能，但是对精子膜功能的完整性没有影响；高浓度的PF能诱发稽子发生顶体反应，其机制可能是促进了细胞内电压依赖性ca：“内流。揭示了PF提高精子受精力

6、的可能内在原因；为精子体外处理技术的发展提供一些实践经验；也为人工授精和体外授精技术的发展提供一定的理论依据和理论参考。关键词：己酮可可碱，精子，低渗肿胀试验，顶体反应，钙离子山西医科大掌醺士学位论文ExperimentalResearchofInfluenceofPentoxifyllineonHumanSpermFunctioninVitroAbstractObjective：ToresearchtheeffectofPentoxifylline(PP0ofdifferentconcentrationsonhumanslx：rInvia

7、bility,motilitylate，motilityfunction．acro$omereaction(AR)，plasmamembranefunctionalintegrityandintracellularcalciumconcentrationinvitro．ToinvestigatethemechanismofPFprovocateAR．Memods：Spermwereasepticallyobtainedbymasturbationandpreparedbyswim-uptechniquetoproduceaspermatoz

8、oasolutionofhighmotilityfrom30healthyfertilemen．Partone,thespermatozoasolutionwasincubate