布鲁氏菌膜相关蛋白的原核表达和抗原性鉴定

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1、摘要本试验通过对马耳他布鲁氏菌基因组的编码序列分析，初步筛选出32种该菌外膜相关蛋白，利用相关生物学软件分析并设计相应的引物，然后以灭活的菌体基因组为模板扩增目的片段．将目的片段直接经限制性内切酶BamHI、EeoRI、Xhol直接酶切后与相应酶切的表达载体pGEX-4T-2连接，构建成功28个重组表达载体；经菌株鉴定、重组载体酶切鉴定和序列分析确定转化菌株后，再经IPTG诱导、SDS--PAGE检测，结果显示9个目的蛋白在大肠杆菌中获得了表达。最后，以布鲁氏菌病临床阳性动物血清为一抗，通过Western-blotti

2、ng初步检测发现6个外膜相关蛋白能够与布鲁氏菌病l

3、缶床阳性动物血清发生免疫学反应．该项研究为进一步筛选布病诊断用的布鲁氏菌外膜相关的蛋白性抗原奠定了基础，同时为蛋白功能鉴定做了前期准备工作。关键词；布鲁氏菌外膜蛋白抗原性AbstractThemajorOUterproteins(OMPs)ofthebacteriaislocatedOntheSurfaceofthebacteriaandcharacterizeda8potentialimmunogenieandprotectiveantigens．Inthisstl

4、ldy'bmcellamembrane-relatedproteinWillsanalyzed，then32proteinswhichmostlylocateoutsideofmembraneworechosed,TheprimersWaSdesignedwithsoftwareofPrimb*T5．0．Thegenomeofbrecellawasextractedfromthestrain16M．andthen32genesofompswemamplifiedbytouchdownPCILTheproductsofP

5、CRandexpressvectorWeredigestedbYthelimiternzymeofEcoRI、BamHandXhoIatthetime．ThefragmentswereligesedatL6"COVernigh‘thentheproductsWat'etransformedintoBL21and28recombinantexpressionstrainswcreobtained．TherecombinantexpressionvectorwasidenfificdbyPCR,restrictionenz

6、ymeanalysisandsequencing，AfterinductionbyIPTG,9combinantfusionprot6nsWerOexpressedintheE．eoliBL21(DE3)induced．SixrecombinationproteinspGEX-4T-2／OMPswerespeciallyrecognizedbysenllnfrombruccllainfectednaturallydairycattle,whichlaysthefoundationforfutxherscreeningt

7、hediagnosticantigensofbrucellosis．keywords：Brucella，MainoutermembraneproteJn(OiP)，antiganicityⅡ缩略词英文全名中文全名aminoacidbasepairnucleotidemilligrammillilitermicrogrammemicrolitreLuria-bertinimediumopticaldensityminutesecondrevolutionsperminutemolekilodaltonampicillin

8、deoxynuclcoside仕iphosphateHorseradishperoxida∞deoxyribonucletdcacidethylenediaminetetraceticacidtsopropytq3-D-thiogalactopyranosidepolymet'a．∞chainreactionphosphate．bufferodsaIincpolyacrylamidogelelcctrophoresisig'diumdodecylsulfatedithiothretol唧readingfxame氨基酸碱

9、基对核苷酸毫克毫升微克微升LB培养基光密度分钟秒每分钟转数摩尔／升千道尔顿氨苄青霉素三磷酸脱氧核苷辣根过氧化物酶脱氧核糖核酸乙二胺四乙酸异丙基．B．D．硫代半乳耱苷聚合酶链式反应磷酸盐缓冲液聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基磺酸钠巯基苏糖醇开放阅读框架马尔他布鲁氏菌基因编号wu64的基因序列wu64的氨基酸序列ⅡI勰姊m衅m雌儿墟∞．茸∽