pkrlike在鲫鱼和草鱼组织中的表达特性分析

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1、摘要依赖双链RNA(dsRNA)激活的蛋白激酶(PICR)是脊椎动物中由干扰素(Interferon,IFN)介导的抗病毒防御机制的重要组成部分，属丝氨酸．苏氨酸蛋白激酶超家族和elf．2a激酶家族，在哺乳动物细胞中广泛存在。鲫鱼类PKR基因(CaPKR．1ike)是第一个报道的非哺乳类PKR同源物。为了解CaPKR．1ike在非哺乳动物各组织中的表达活性，本文用已经表达的勋结构域融合多肽(P踟lza2)，经过亲和层析纯化并免疫家兔，制备了CaPKR-likeN．端包含Za结构域的多克隆抗体。并利用该抗体检测CaPKR—like在鲫鱼与草鱼的正常组织和经PolyI：c诱导后的组织表达特

2、性。Westernblots显示在未经诱导的鲫鱼和草鱼各个所检组织(脑、脾、肝、心、肌肉、肾、肠、皮肤)中该基因表达水平非常低，但是经PolyI：C免疫诱导一周后，在鲫鱼和草鱼等8种组织中有较强的PKR．-like蛋白产生。其中，在鲫鱼中心脏、肝脏、脾脏、肾、肌肉等组织中该基因表达较强，而在肠道和皮肤的表达略弱。在草鱼中脑、心脏、肌肉、肝脏、皮肤等组织中该基因表达较强，而在脾脏、肠道、肾等组织中表达略弱。为了解CaPKR．1ike在鲫鱼细胞中的定位，用PolyI：C免疫诱导了鲫鱼组织，利用免疫荧光细胞化学技术对PKR基因在鲫鱼组织中的表达进行了分析，结果显示PKR基因在经PolyI：C

3、诱导一周后的鲫鱼细胞比在未经诱导的鲫鱼细胞中表达明显。且发现CaPKR．1ike主要定位在鲫鱼细胞质中。关键词：PKR；CaFKR-]ike；zn；表达；鲫鱼；草鱼；PolyI：C；蛋白质印迹法；免疫荧光技术AbstraetABSTRACTPKRisadsRNA-dependentproteinkinasethatisinducedbyinterferontreatment．PKRisanimportantcomponentofantiviraldefensemechanismthatbelongstothe$erine·-threonineproteinkinasesupeffami

4、lyandtheelf··2akinasefamily．PKRwasfoundinalmostallmammaliancells．AfishPKR—likegene，namedCaPKR—like，wasthefirstidentifiedfishgenemostsimilartomammalianPKR．InordertorealizetheexpressionofCaPKR—likeinthetissuesofnon-mammalian,thispaperusederueiancarpandgrasscarpfortheorganizationofbiologicalmateria

5、ltostudynon-mammalianorganizationsintheexpressionCaPKR—likeactivity．MulticlonalantibodyWasprepairedfromrabbitimmunizedbypurifiedPzaIZa2．Westernblotsrevealedthatcruciancarpandgrasscarporganization@rain,spleen,liver,heart，muscle，kidney,intestines，skin)withoutinduced，CaPKR-likehadaverylowlevelofcon

6、stitutiveexpression．ButthelevelWasup-regulatedinstimulatedwithPolyI：CforS(：Vendaysineighttissuesofcrueiancarpandgrasscarp．Intheheart,liver,spleen,kidneyandmuscletissueofCruciancarp，CaPKR-likeexpressionisstrongandisslightlyweakinintestinalandskin．Intheb

7、mn，heart,muscle，liver,skintissueoftheglassc

8、arp，CaPKR-likeexpressioniss订ongandisslightlyweakinthespleen,intestine，kidney．InducedcruciancarpbyPolyI：C，thenanalyzedthetissuesofcmciancarpbyimmunofluoresencetounderstandthelocationofCaPKR．1ikeincellsofthecrueiancarp．Theresu