采用巢式pcr和低亲和力试验检测梅毒早期感染的研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：2007年5月20日关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采

2、用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：导师签名：日期：2007年5月20日2中文摘要梅毒（Syphilis）是危害性很大的性传播性疾病（STD）。监测数据显示，我国现阶段梅毒发病率持续增高，防治形势严峻，同时，梅毒患者容易感染或传播艾滋病(AIDS)。因此，早期诊断并及时治疗对梅毒预防控制至关重要。本研究期望通过建立巢式PCR技术及运用改良ELISA、改良蛋白印迹技术对血清中特异性Tp-IgG抗体亲和力检测来区分梅毒早期或晚期感染。根据TPpol

3、A基因序列，初步建立巢式PCR技术，对比DF、TRUST、TPPA、TP-IgMELISA、TP-IgGELISA等检测法对31例确诊为一期梅毒的皮损组织液、血清进行平行检测；通过改良ELISA技术和改良蛋白印迹（WB）技术，对15例确诊为一期梅毒和21例潜伏(latent)梅毒的患者血清进行TP-IgG抗体亲和力检测。结果显示：巢式PCR在检测TP标准株和对照菌株时具有高度的特异性，只扩增TP标准株，并能检测到1个/ul的TP菌液浓度。应用该巢式PCR检测上述31例一期梅毒硬下疳组织液，2阳性率达9

4、0.32%，高于暗视野检查（Darkfield,DF）结果54.84%，差异有显著性（χ=8.10，P〈0.005），略高于TPPA结果87.1%，但无统计学差异。应用该巢式PCR检测血清中TP-DNA的阳性率为12.90%（4/31），明显低于组织液巢式PCR和其它常规方法（TRUST阳性率为74.19%、TP-IgMELISA阳性率为61.29%，TP-IgGELISA阳性率为74.19%），可能与一期梅毒血清中TP含量低有关，说明一期梅毒血清不能作为理想的标本用于TP-DNA检测。与TPPA比较

5、，DF、2TP-IgM阳性率较低，差异有显著性。而TP-IgM与TP-IgG阳性率比较,差异无显著性(χ=0.66,P=0.42＞0.05)。改良ELISA法结果显示，经变性剂8M尿素溶液处理过的样本，15例一期梅毒样本中，7例吸光度出现下降，8例则反而有所增加；21例潜伏梅毒只有6例出现下降，15例增加，说明这种方法不宜用作TP抗体亲和力试验，与文献报道一致。改良WB结果显示，在15例一期梅毒样本中，有14例产生阳性反应，8M尿素处理试验后，15、17、45、47kDa等4条抗原区带的颜色强度都出现

6、明显下降，经wilcoxon检验，均有显著性差异。而在对照组21例潜伏梅毒样本的常规WB试验和亲和力试验，所得到的数据经wilcoxon检验，4条抗原带颜色强度的降低也出现相同的显著性差异，无法确定哪一特异抗体为低亲和力抗体，与WoznicovaV等报道的针对17kDa的抗体可作为区分早期或晚期梅毒感染的低亲和力抗体不相符，原因有待进一步的研究。综合以上结果，巢式PCR对一期梅毒溃疡组织液的TP-DNA检测具有较高的敏感性和特异5性，比传统的DF方法敏感，可以替代DF方法用于一期梅毒的早期诊断。血清巢

7、式PCR虽然阳性率低，但其结果揭示，在病程约1周的极早期梅毒，血液中有梅毒螺旋体存在，此时正是血清学可能呈阴性的时间，如果献血员处于此时间内极容易造成血液梅毒传播，应引起重视。本研究在国内首次应用改良WB对梅毒血清进行低亲和力抗体检测，结果表明通过该方法未能区分梅毒早期和晚期感染。关键词：梅毒感染巢式PCR亲和力抗体检测6TheApplicationofNestedPCRandLowAvidityTestsfortheDetectionofEarlySyphilisInfectionABSTRACTS

8、yphilisisaharmfulsexuallytransmitteddiseasewhichhascurrentlybeeninacriticalperiodofincreasinglyhighincidencerateinChina,asisrevealedbysurveillance;meanwhile,syphilispatientsarepronetobeinfectedwithAIDS.Earlydiagnosisandtimelytrea