应用微卫星dna对holstein奶牛进行亲子鉴定

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2、复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权堂撞可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：鲁玉’莨赢字：扣闪签字日期：2008年6月S日签字日期：200P年彳月S日山东师范大学硕士学位论文应用微卫星DNA对Holstein奶牛进行亲子鉴定中文摘要本实验的目的在于通过使用微卫星DNA检测荷斯坦牛的遗传多态性，进而建立一种适用于牛的亲子鉴定体系。微卫星DNA(又称短串联重复序列，或简单重

3、复序列)是以1—6bp的短核苷酸为基本单位，首尾相连组成的串联重复序列。大多数重复单位是二核苷酸，也有少量含有1、3至6个核苷酸的重复单位，重复次数一般在5次以上，可高达100次，片段长度通常在400bp以下。微卫星DNA由其核心序列和两侧的侧翼序列构成，侧翼序列使某一微卫星特异定位在染色体的一定位置，核心序列重复数的不同是构成微卫星多态性的基础。大于10次重复的微卫星DNA序列具有高度的种属多态性，从植物到脊椎动物这种多态性有很大的差别。正是由于微卫星DNA序列具有长度多态性的特点，它可用来对动物进行

4、亲子鉴定。本文选用联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)联合推荐的用于牛遗传分析的12个微卫星基因座，利用PCR和聚丙烯酰胺电泳银染技术对来自不同牛场的loo头荷斯坦牛进行了遗传多态性检测。12个STR基因座的杂合度、多态信息含量、有效等位基因数的均值为O．8711、O．8574、8．1666，这些基因座的遗传杂合度及多态信息含量高，均为高度多态位点，12个STR的累积非父排除概率为99．999999％，适用于动物的遗传分析和个体鉴定。应用这12个微卫星基因座对三种不同情况的36头不同家

5、系的荷斯坦牛进行了亲子鉴定：第一种情况是给定父母双方与子代，排除一方父母的情况；第二种情况是给定父母双方与子代，排除父母双方的情况；第三种情况是给定一方父母与子代，排除其具有亲缘关系的情况。结果显示三种不同情况下都能成功认定其生物学亲缘关系，因此这12个微卫星位点可以用作亲权鉴定的微卫星标记组合。本实验还对多重PCR的反应条件进行了探索，成功地优化到了该12个基因座四组三重PCR反应条件。四组分别为：组j合l：ETHlo．BMl824．ETH225山东师范大学硕士学位论文组合2：BMl8l8-INRA0

6、23．cSsM66组合3：ILsTs006一THLA53．INRA037组合4：INRA063．HEL9．TGLAl26利用多重PCR可以对动物进行遗传分析，但因微卫星片段长度大多为100．300bp，且位点多态性高，同一位点片段长度在不同群体中跨度大，所以在多重PCR的结果分析图上，非特异性条带多，或者有条带重叠而导致判读错误。因此在亲子鉴定中，如果不能使用荧光多重PCR进行分析，那么还是单个位点的PCR分析结果更适合于亲子鉴定。一般认为微卫星DNA多态性产生的原因是DNA复制和修复过程中的碱基的滑动

7、、错配或减数分裂过程中姊妹染色单体的不均等交换。通过测序分析了其中一个微卫星位点不同基因型的重复单元，测序结果显示：分析结果与理论值一致。关键词：微卫星；亲子鉴定；多重PCR山东师范大学硕士学位论文ApplyingMicrosatellitesDNAtoIdentifythePaternityofHolsteinAbstractTheobjectiVesofthissnldyweretotestthegeneticpolymo印hismofHolsteinbyMicrosatellitesDNA，and

8、如nhertosetasystemofidemi聊ngmeparcntageforcattle．MicrosatellitesDNA(shorttandemr印eats，STR；simpler印eatsequences，SRS；SimpleSequenceofR印eats，SSR)isaspecialclassoftarldemlyrepeatedDNA．inwhichaspecificmotifof1—6bpisr印eatedupt010