gbt 27642-2011 牛个体及亲子鉴定微卫星dna法

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1、ICS65．020．30B43囝目中华人民共和国国家标准GB／T27642—2011牛个体及亲子鉴定微卫星DNA法BovineindividualandparentalidentificationusingmicrosatelliteDNA2011-12-30发布2012-04—01实施宰瞀髁鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会促191范围牛个体及亲子鉴定微卫星DNA法本标准规定了利用微卫星DNA标记进行牛个体及亲子鉴定的技术规程。本标准适用于普通牛(Bostaurus)个体和亲子鉴定。2规范性引用文件GB／T27642

2、--2011下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GA／T383法庭科学DNA实验室检验规范SN／T1193基因检验实验室技术要求3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本文件。3．1聚合酶链式反应polymerasechainreaction，PCR以一对寡核苷酸引物、四种脱氧核糖核苷酸(dNTPs)为原料，在合适的温度、离子条件和耐热DNA聚合酶催化下，在体外人工合成特异的DNA片段的过程。3．2

3、微卫星DNAmicrosatelliteDNA亦称短串联重复序列或简单重复序列(shorttandemrepeats，STRs；simplesequencerepeats，SSRs)，以1bp～6bp的短核苷酸序列为基本单位，呈串联重复状散在分布于生物体基因组中。3．3非父排除概率probabilityofpaternityexclusion，PE通过检测某一个遗传标记，能将不是生父的争议父亲排除的概率。3．4累积非父排除概率cumulativeprobabilityofpaternityexclusion，CPE通过检测某

4、一遗传标记系统的多个遗传标记，将不是生父的个体否定掉的累计概率。3．5亲权指数paternityindex，PI争议父亲提供生父等位基因成为子代生父的概率与随机公畜提供生父基因成为子代生父概率的比值。3．6累积亲权指数cumulativepaternityindex，CPI根据某一遗传标记系统中的多个标记，计算多个亲权指数的累积。3．7父子关系相对概率relativechanceofpaternity，RCP争议父亲是亲生父亲的相对概率。1GB／T27642--20114原理4．1个体鉴定原理某一被检样品与真样品微卫星标记的

5、基因型不同，则判定被检样品与真样品来自不同个体，如果相同不排除它们来自同一个体，通过对某一遗传标记系统的多个标记所检测，可在一定概率水平上判定被测样品与真样品是否来自同一个体。4．2亲子鉴定原理根据孟德尔遗传分离定律，在配子细胞形成时，成对的等位基因彼此分离，随机进入配子细胞。双亲的配子细胞结合形成合子，其发育出来的子代的成对等位基因分别来自父亲和母亲。根据多个标记计算的鉴定结果在一定概率水平上可以判定争议父亲(母亲)是否为亲生父亲(母亲)(变异情况除外)。5防污染措施按SN／T1193和GA／T383规定的方法执行。6个体

6、鉴定和亲子鉴定试验步骤6．1样品制备收集血液、组织(耳、肌肉、尾、皮肤等)、毛囊或精液等材料。6．2样品DNA的制备各样品试剂配方、所需的仪器设备参见附录A，具体步骤参见附录B。6．3光谱校正在实验前进行一次四色荧光素的光谱校正，目的为了校准信号重叠。具体步骤参见C．1。6．4微卫星DNA标记参见附录D。6．5PCR反应6．5．1PCR反应体系参见表C．1。6．5．2PCR反应程序参见表C．2。6．5．3PCR产物电泳检测取适量PCR产物，上样于1％～3％的琼脂糖凝胶中进行电泳，检测本次扩增反应是否成功。6．6测定殛分析通过

7、分析得到微卫星标记的基因型频率。参见C．3。6．7利用微卫星DNA法进行个体鉴定的概率计算和结果表述GB／T27642--201被检样品的基因型与真样品不同，可排除两份样品来源于同一个体(变异情况除外)。如果两份样品的基因型相同时，则按式(1)计算偶合概率，当其值小于该个体所在群体数量的倒数时(5×10_9)，认定两份样品来源于同一个体。偶合概率是一组微卫星标记基因型频率的乘积。PM—P1×P2×P。×⋯⋯×P。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(1)式中：Pu——偶合概率}P——第i个微卫星标记的基因型频率。6．8利用微卫星DNA法进行

8、亲子鉴定认定和排除依据累积非父排除率≥99．73％、父子关系相对概率≥99，95％或累积亲权指数≥2000，判定争议父亲为生父；累积非父排除率低于99．73％并且有3个以上标记不符合孟德尔遗传分离规律时，排除亲缘关系；如果累积非父排除率低于99．73％并且有3个以下的作为不符合孟德尔遗传分