透明质酸寡糖的制备与其活性分析

《透明质酸寡糖的制备与其活性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东大学硕士学位论文HAECMICMHAaseLMW—HAM。PDo．HAHPGPCDaCAMMTTSDSPBSP—gpHUVECVEGFbFGFK562／SK562／A02VRPADRMDRIC506符号说明透明质酸细胞外基质细胞问基质透明质酸酶低分子量透明质酸重均分子量分散指数透明质酸寡糖高效凝胶渗透色谱道尔顿鸡胚绒毛尿囊膜噻畔蓝十二烷基磺酸钠磷酸盐缓冲液P糖蛋白人脐静脉血管内皮细胞血管内皮细胞生长因子碱性成纤维细胞生长因子白血病细胞白血病多药耐药细胞维拉帕米阿霉素多药耐药性半数抑制浓度山东大学

2、硕士学位论文第一章前言透明质酸(hyaluronicacid，HA)，又称作玻璃酸，是由Ⅳ．乙酰氨基葡糖和D一葡糖醛酸双糖重复单位通过肛(1—4)糖苷键和肛(1斗3)糖苷键组成的无分支的糖胺聚糖。在生理条件或适当的pH环境下，HA分子中糖醛酸的羧基解离，可与反离子如Na+、C等生成盐【ll，最常见的盐为透明质酸钠(又称玻璃酸钠sodiumhyaluronate，SH)。HA存在于脊椎动物的各种组织中。HA因其独特的流变学特性、黏弹性、保湿性以及良好的生物相容性而用作眼科手术辅助剂、关节润滑剂、术后防

3、粘连制剂、化妆品保湿剂、食品添加剂等。HA研究开发不断取{{导新的进展，近年来其在临床诊断、作为缓释制剂药物媒介等方面的研究不断深入，HA寡糖(oligosaccharidesofhyaluronan，简称o-HA)也越来越引起科研工作者的关注，并取得了一定的研究成果。o-HA是相对分子质量(脚)1×104D以下、单糖残基数量为2-40的HA分子片段，结构如图1．1所示。o．HA属于小分子多糖，其性质与普通HA有很大不同，甚至具有完全相反的作用。《==>r、忮)、o硎I渊∞铂milll·擘图l-1透

4、明质酸寡糖(2～20个单糖残基)结构示意图1HA的分布、结构、性质与生理功能I．1HA的分布HA是构成细胞外基质(extraeeilularmatrix，ECM)和细胞间基质(intercellularmatrix，ICM)的主要成分。它主要存在于人体的肾脏、肝脏、脾脏、关节、玻璃体、脐带等器官和房水、血浆等体液中。HA是ECM中主要的黏多糖，在动物组织中的分布较为广泛，人们已从结缔组织、脐带、皮肤、鸡冠、关节滑液、眼玻璃体等组织中分离出了HA。据报道，HA在软结缔组织中的浓度最高，在血浆中的浓度最

5、低‘2卅。7山东大学硕士学位论文HA在各组织、器官中的浓度或含量相对比较稳定，若某一组织、器官中HA的含量或浓度出现极为明显的变化(含量或浓度升高或降低)，就说明该组织、器官存在某种病变。运用这一原理将HA作为一种诊断指标已被应用于临床医学，即通过检测HA含量变化诊断疾病。1．2HA的结构HA于1934年被发现以后，随着人们对HA纯化技术的不断提高，对HA结构的研究取得了极大的进步。通过许多研究者的努力，现已发现HA不仅具有一级结构，还存在着二级结构(螺旋结构)和三级结构(网状结构)。已证实HA的一

6、级结构为无分支的长链，由(1．卢4)D．葡糖醛酸(1j卢3)Ⅳ-乙酰基．D一氨基葡糖的双糖单位重复连接而成【51，长链中不含有其它任何糖类或非糖单位，同时通过电子衍射法等最新的检测方法显示HA分子链中也不存在任何分子内的共价键。1．3HA的性质1．3．1一般性质HA具有许多天然黏多糖共同的性质，固体为白色絮状或无定形粉末，无嗅，无味，具有较强的吸湿性；溶于水，不溶于醇、酮、乙醚等有机溶剂；水溶液的比旋度为一700～一800；在水溶液中带负电，电泳时移向正极；与阿利新蓝、亚甲蓝反应呈蓝色。1．3．2流

7、变学特性Laurent很早就以“随机的、松展的、具有一定刚性的线团”来形容HA在水中的状态。Wikl61报道Mr为4X106Da的HA，在浓度不到O．1％时其分子所形成的随机线团即可占据整个溶液空间；浓度达到O．3％或更高时，HA分子所形成的线团相互缠绕，形成连续、柔韧的网状结构，赋予其溶液特异的流变学性质。黏度是衡量液体流动阻力的一种参数。HA溶液的浓度或Mr越大，HA分子的缠绕程度则越高，黏度也就越大。低Mr或低浓度时，溶液的黏度随Mr或浓度的增加变化较小，对此现象可解释为HA分子在此情况下为一

8、独立的单体，分子间不发生缠绕。当Mr和浓度的提高使黏度达10mPa·s后，此时HA分子发生缠绕，黏度随Mr或浓度的提高而明显提高，如Mr或浓度提高至1．8倍可使黏度提高至10倍I们。L3．3黏弹性8山东大学硕士学位论文HA溶液由于含有分子网状结构，可同时具有凝胶的弹性和溶液的黏性这一双重特性，Balazs将HA的这一特性称之为黏弹性。1．3．4交联反应HA可溶于水，但在术后防粘连等临床应用中经常需要使其在体内保留较长时间，就需要将HA与交联剂反应形成交联的不溶性HA凝