破瘀散结法诱导体外培养的食管癌ec9706细胞凋亡的实验分析

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1、山东中医药大学2005届碰士学位论文3结果3．1形态学观察分析3．1．1倒置显微镜观察活细胞正常EC9706细胞呈上皮型，贴壁生长，生长状态良好的细胞充分伸展，透亮度好。加入中药后，若浓度较高，在10一12h即可见到死亡的细胞。表现为细胞皱缩，折光性不好，与周围的细胞分离、漂浮，形态不规则或呈圆形，细胞内部结构不清楚(见图1)。在消化收集药物作用后的细胞时，发现一些仍贴壁无明显死亡特征的细胞与空白对照组细胞相比，其回缩状态不良，尤其在药物浓度较高时。3．1．2透射电镜现察结果参照文献【51记载观察到：未处理

2、的对照细胞形态规则，表面有细小的微绒毛，核仁明显，核染色质匀细。发生凋亡的细胞外形不规则，有多个大小不等的圆形或半圆形突起物，内含排列密集的细胞器，细胞表面的微绒毛减少或消失，细胞核崩解成碎块，形成凋亡小体。一些无明显凋亡特征的细胞表面，可见到不规则的微绒毛，或细长或粗大，分布不均。(觅图2—7)3．2流式细胞仪分析EC9706细胞株经含不同浓度食管癌l号培养48h后，在DNA直方图上可见细胞凋亡峰(AP峰)：浓度为1咖l和浓度为O．s咖l中药提取液组作用48h凋亡率分别为24．47％和20．43％；其中以

3、lg／ml组作用后的EC9706细胞凋亡最为典型，而空白组为0．64％，各剂量组与空白对照组比较均有显著性差异(P<0．01)，即加药组凋亡率显著高于空白组。浓度为19／ml和浓度为O．59／ml中药提取液组分别与5一Fu组比较有显著性差异(P<0．01)，即高浓度中药组凋亡率高于西药组。且随药物浓度增大，细胞凋亡率增高，在O．1～19／ml的浓度范围内有明显的剂量依赖性，即药物浓度与凋亡率呈正相关。表1经流式细胞仪分析统计学处理所得各组凋亡率4破瘸散结击请导体外培养的仓管癌EC9706细胞凋亡的窭验研膏图

4、1倒置显微镜下观察加药48小时后的形态正常EC9706细胞呈上皮型，贴壁生长，生长状态良好的细胞充分伸展，透亮度好。加入中药后，若浓度较高，在lO一12h即可见到死亡的细胞。表现为细胞皱缩，折光性不好，与周围的细胞分离、漂浮，形态不规则或呈圆形，细胞内部结构不清楚。山东中医药大学2005届硕士学位论文透射电镜下的形态图2未用药癌细胞形态：形态规则，表面有细小的微绒毛，核仁明显，核染色质匀细。图3癌细胞经中药作用后，细胞核缩小、变圆，染色质凝聚，胞质线粒体少，内质网肿胀图4细胞膜有小泡膨出(箭头)，周围见脱落

5、的胞质小泡图5癌细胞核变圆，染色质凝集成大块或半月状，靠近核膜图6凋亡小体有的可见有胞膜(箭头)图7固缩细胞，胞质致密，染色质致密。另一细胞胞质包绕一凋亡小体(空箭头)6破瘀散黠法诱导体外培养的食管癌EC9706细胞凋亡的实验研究Ⅲ组(19／ml中药)Apoptosis：24．47％II组(西药对照组)Apoptosis：16．22％Ⅵ组(O．19／ml中药)Apoptosis：7．27％I组(空白对照组)hpoptosis：0．64％图8流式细胞仪监测细胞周期分析图7山东中医药大学2005届硕士学位论文讨

6、论1现代医学对食管癌的认识食管癌是世界上最常见的癌症之一，其高危险性地区从中幽的中北部开始向西跨越中亚到伊朗北部。我国是世界，卜食管癌的高发国家，也是目前世界上食管癌死C：率最高的国家之一，每年平均死亡率为14．59／10万人口，在伞圈恶性肿瘤死亡总数中占22．34％，仅次于胃癌，居第二：位。我国食管癌主要高发区位于太行I』I脉交界区的华北三省(河南、河北、陕西)，其中河南省的林县其死亡率男性高达161．33／10万人口，女性为102．88／10万人口，居全国首位。食管癌的发病率男性多于女性，性别比例一般为

7、2~4：1。’国外某些地区，女性高于男性。引起食管癌的病因至今尚未明确，有多方面因素。其中有些可能是主导因索，有砦是促进因素，也有些或许只是相关因素。①化学物质：如长期进食含Ⅱ硝胺量较高的食物。②生物因素：如某些真菌有致癌作用，有些真菌能促使={『f!硝股及其前体形成。③缺乏某些微量元素：如钼、铁、锌、氟、硒等。④缺乏维生素：如维生素A、B2、c。⑤烟、酒、热食热饮、口腔不洁等因素：如长期饮烈性酒、嗜好吸娴、食物过硬、过热、进食过快、炎症、创伤或口腔不浩、龋齿等对局部粘膜的慢性刺激引起癌变。⑧遗传易感因素。

8、多数研究者认为，食管癌的病因是山环境中致癌物所引起的疾患。但是，目前所提出的发病因素中，尚没有一个被普遍接受的因素能晚明各个高发区的现象。从现有资料来看，食管癌可能是多种因素所致的疾病。不同的地区，发病原因可能不同。即使同一地区，不同患者的原因，电町能不相同。在已提出的病因因素中，最引人注目并得到广泛研究的是亚硝胺类化合物。这类化合物及其前体分布很广，可在体内、外形成。研究证明，近30种业硝胺，能诱发动物的食管癌