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《破瘀散结法诱导体外培养的食管癌ec9706细胞凋亡的实验分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、山东中医药大学2005届碰士学位论文3结果3.1形态学观察分析3.1.1倒置显微镜观察活细胞正常EC9706细胞呈上皮型,贴壁生长,生长状态良好的细胞充分伸展,透亮度好。加入中药后,若浓度较高,在10一12h即可见到死亡的细胞。表现为细胞皱缩,折光性不好,与周围的细胞分离、漂浮,形态不规则或呈圆形,细胞内部结构不清楚(见图1)。在消化收集药物作用后的细胞时,发现一些仍贴壁无明显死亡特征的细胞与空白对照组细胞相比,其回缩状态不良,尤其在药物浓度较高时。3.1.2透射电镜现察结果参照文献【51记载观察到:未处理
2、的对照细胞形态规则,表面有细小的微绒毛,核仁明显,核染色质匀细。发生凋亡的细胞外形不规则,有多个大小不等的圆形或半圆形突起物,内含排列密集的细胞器,细胞表面的微绒毛减少或消失,细胞核崩解成碎块,形成凋亡小体。一些无明显凋亡特征的细胞表面,可见到不规则的微绒毛,或细长或粗大,分布不均。(觅图2—7)3.2流式细胞仪分析EC9706细胞株经含不同浓度食管癌l号培养48h后,在DNA直方图上可见细胞凋亡峰(AP峰):浓度为1咖l和浓度为O.s咖l中药提取液组作用48h凋亡率分别为24.47%和20.43%;其中以
3、lg/ml组作用后的EC9706细胞凋亡最为典型,而空白组为0.64%,各剂量组与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.01),即加药组凋亡率显著高于空白组。浓度为19/ml和浓度为O.59/ml中药提取液组分别与5一Fu组比较有显著性差异(P<0.01),即高浓度中药组凋亡率高于西药组。且随药物浓度增大,细胞凋亡率增高,在O.1~19/ml的浓度范围内有明显的剂量依赖性,即药物浓度与凋亡率呈正相关。表1经流式细胞仪分析统计学处理所得各组凋亡率4破瘸散结击请导体外培养的仓管癌EC9706细胞凋亡的窭验研膏图
4、1倒置显微镜下观察加药48小时后的形态正常EC9706细胞呈上皮型,贴壁生长,生长状态良好的细胞充分伸展,透亮度好。加入中药后,若浓度较高,在lO一12h即可见到死亡的细胞。表现为细胞皱缩,折光性不好,与周围的细胞分离、漂浮,形态不规则或呈圆形,细胞内部结构不清楚。山东中医药大学2005届硕士学位论文透射电镜下的形态图2未用药癌细胞形态:形态规则,表面有细小的微绒毛,核仁明显,核染色质匀细。图3癌细胞经中药作用后,细胞核缩小、变圆,染色质凝聚,胞质线粒体少,内质网肿胀图4细胞膜有小泡膨出(箭头),周围见脱落
5、的胞质小泡图5癌细胞核变圆,染色质凝集成大块或半月状,靠近核膜图6凋亡小体有的可见有胞膜(箭头)图7固缩细胞,胞质致密,染色质致密。另一细胞胞质包绕一凋亡小体(空箭头)6破瘀散黠法诱导体外培养的食管癌EC9706细胞凋亡的实验研究Ⅲ组(19/ml中药)Apoptosis:24.47%II组(西药对照组)Apoptosis:16.22%Ⅵ组(O.19/ml中药)Apoptosis:7.27%I组(空白对照组)hpoptosis:0.64%图8流式细胞仪监测细胞周期分析图7山东中医药大学2005届硕士学位论文讨
6、论1现代医学对食管癌的认识食管癌是世界上最常见的癌症之一,其高危险性地区从中幽的中北部开始向西跨越中亚到伊朗北部。我国是世界,卜食管癌的高发国家,也是目前世界上食管癌死C:率最高的国家之一,每年平均死亡率为14.59/10万人口,在伞圈恶性肿瘤死亡总数中占22.34%,仅次于胃癌,居第二:位。我国食管癌主要高发区位于太行I』I脉交界区的华北三省(河南、河北、陕西),其中河南省的林县其死亡率男性高达161.33/10万人口,女性为102.88/10万人口,居全国首位。食管癌的发病率男性多于女性,性别比例一般为
7、2~4:1。’国外某些地区,女性高于男性。引起食管癌的病因至今尚未明确,有多方面因素。其中有些可能是主导因索,有砦是促进因素,也有些或许只是相关因素。①化学物质:如长期进食含Ⅱ硝胺量较高的食物。②生物因素:如某些真菌有致癌作用,有些真菌能促使={『f!硝股及其前体形成。③缺乏某些微量元素:如钼、铁、锌、氟、硒等。④缺乏维生素:如维生素A、B2、c。⑤烟、酒、热食热饮、口腔不洁等因素:如长期饮烈性酒、嗜好吸娴、食物过硬、过热、进食过快、炎症、创伤或口腔不浩、龋齿等对局部粘膜的慢性刺激引起癌变。⑧遗传易感因素。
8、多数研究者认为,食管癌的病因是山环境中致癌物所引起的疾患。但是,目前所提出的发病因素中,尚没有一个被普遍接受的因素能晚明各个高发区的现象。从现有资料来看,食管癌可能是多种因素所致的疾病。不同的地区,发病原因可能不同。即使同一地区,不同患者的原因,电町能不相同。在已提出的病因因素中,最引人注目并得到广泛研究的是亚硝胺类化合物。这类化合物及其前体分布很广,可在体内、外形成。研究证明,近30种业硝胺,能诱发动物的食管癌
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