嘌呤受体亚型p2y-%2c2-在先天性巨结肠中的表达及意义

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1、中国医科大学硕士学位论文嘌呤受体亚型P2Y<,2>在先天性巨结肠中的表达及意义姓名：韩秀芳申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：黄英20090301·中文论著摘要·嘌呤受体亚型P2Y2在先天性巨结肠中的表达及意义刖吾先天性巨结肠(Hirschsprung’sdisease，HD)是婴幼儿常见的消化道畸形，是一种肠神经系统(Entericnervoussystem，ENS)发育异常的疾病。神经嵴源性细胞进入肠道后逐渐迁移、增殖、受肠道微环境影响后停止增殖，逐渐聚集最终分化形成神经节细胞及胶质细胞，构成肠神经节，在此过程中出现任何异常都可能导致神经节细胞的缺失，最终形成HD。三磷酸腺苷(

2、Adenosinetriphosphate，ATP)作为一种神经递质，可能参与了神经元的分化、迁移、存活，还可以促进神经元的修复，其作用的发挥必需与受体结合，其受体有Pl、P2两种，P2受体又分为P2X、P2Y。目前为止已发现的P2Y有8个亚型，其中在胃肠道P2Y2亚型分布最为广泛。在肠神经系统内，P2Y受体主要调节肌肉的松弛，在肠神经系统发育过程中如果P2Y2表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍，从而使肠管处于持续痉挛状态，这揭示了P2Y2与HD的发生存在一定关系，但P2Y2在HD肠管的表达及分布情况国内尚未见报导。本研究通过观察HD患儿正常段、移行段和痉挛段内P2Y2受体的分布及相对

3、表达量，以正常段为对照组，移行段及痉挛段分别设为实验组1和实验组2，比较相互之间P2Y2的分布及表达情况是否存在差异，进一步探讨这种差异在HD发病机制中的意义。材料与方法一、病例标本收集来自中国医科大学附属盛京医院小儿外科的30例经手术根治的HD患儿的手术标本，患儿年龄为23天．5．5月(男25例，女5例，平均年龄67．37士42．28天)，其中长段型5例，短段型6例，常见型19例。二、实验试剂P2Y2多克隆抗体(购自美国Abcam公司)；二步法山羊免疫组化检测试剂盒(购自武汉博士德公司)；逆转录试剂盒(购自大连宝生物工程有限公司)。三、实验方法选取患儿肠管标本的正常段、移行段和痉挛段

4、全层组织分别设为对照组、实验组1及实验组2，通过免疫组化方法及RT-PCR方法观察P2Y2在各组中的分布及表达，所有数据均以；±，表示，差异比较采用SPSS13．0统计软件分析，组问差异采用方差分析，p<0．05表示差异有统计学意义。结果一、免疫组化结果在对照组及实验组1肠管标本的纵肌层、环肌层和肌间的神经丛中可见P2Y2阳性细胞的分布及表达，与对照组相比较，实验组1中P2Y2阳性细胞的数目少且免疫反应较弱，差异具有统计学意义(萨O．01)。实验组2肠管标本中则未见P2Y2阳性细胞的分布及表达，与对照组相比差异明显(萨0．01)。二、RT-PCR实验结果在对照组(正常段肠管)及实验组l

5、(移行段肠管)中P2Y2mRNA均有表达，相对表达量分别为(O．57364-0．07066)、(0．26794-0．3817)，其差别具有统计学意义护0．ooo)，P2Y2mRNA在实验组2(痉挛段肠管)中无明显表达，其与对照组、实验组1标本中P2Y2的表达具有显著性差异p分别为O．00，0．011)。结论皇口◆匕与正常段肠管组织相比，HD患儿病变段肠管中ATP受体P2Y2表达缺失或者显著减低，P2Y2的表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍使肠管处于痉挛状态，有可能在HD的发生过程中发挥了一定的作用。关键词先天性巨结肠；P2Y2受体；免疫组化；逆转录聚合酶链反应2·英文论著摘要·TheE

6、xpressionandSignificanceofP2Y2PurinergicReceptorSubtypesinHirschsprung’SDiseaseIntroductionHirschsprung’Sdisease(Hirschsprung’Sdisease，HD)isacommondigestiveractofinfantmalformation，isakindofEntericnervoussystem(Entericnervoussystem，ENS)dysphasiadiseases．Neuralcrest-dedvedcellsintotheintestinegra

7、duallymigration，proliferation，bytheintestinemicroenvironmentalimpacttostoptheproliferation，andgraduallygatheredtoformthefinaldifferentiationofganglioncellsandglialcells，whichconstituteintestinalganglion,inthisprocessanyproce