耐热糖化酶糖化条件及酶学性质的研究

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1、摘要摘要通过筛选实验室保存的黑曲霉(Aspergillusnige，3．4309)突变株，得到两株产耐热糖化酶的菌株9．1．D及18．3．H，其所产糖化酶G9．1-D及G18_3-H的最适作用温度均为60℃，比出发株糖化酶的最适温度提高10℃，表明两株突变株能分泌耐热糖化酶；在各自的最适温度下，出发株糖化酶的比活力为131．23U／mg，耐热糖化酶G9．1．D的比活力为171．10U／mg，耐热糖化酶Gls-3．H的酶活为142。83U／rag，分别比出发株糖化酶高30％君n9％。耐热糖化酶G9-l-D及Gls-3-H60℃条件下糖化液DE值达到70％时，所需

2、反应时间为10h，与出发株糖化酶相比，缩短反应时间10h；70℃条件下糖化液DE值达到70％时，所需反应时间为5h，与出发株相比，缩短反应时间15h。耐热糖化酶G9．1-D及G悔，．H的最适糖化温度为70℃。耐热糖化酶G9．I-D的最适复合添加剂为：50mmo·L。Na+、0．05mol·L‘1甘油、3g·L。1黄原胶、2g·LJ海藻酸钠，在最适复合添加剂存在时，糖化过程中DE值升高的速度加快，70℃条件下糖化液的DE值达到85．50％，比对照提高7．86。耐热糖化酶G18_3．H的最适复合添加剂为：50mmol·L～Na+、0．05mol·L。1甘油、2g．

3、L以黄原胶、3g·L-l海藻酸钠，在最适复合添加剂存在时，70℃条件下糖化液的DE值达到81．40％，比对照提高5．77。出发株糖化酶的最适复合添加剂为：50mmol·LJNa+、0．03mol·L。甘油、3g·L‘1黄原胶、3g·L。1海藻酸钠。在最适复合添加剂存在时，70℃条件下糖化液的DE值达到76．38％，比对照提高7．81。结果表明，复合添加剂的存在能够在糖化过程中保护酶的三维构象。耐热糖化酶G9．1-D及G18-3．H分别含有三个同工酶组分1’、2’、3’，均为糖蛋白，组分G9-I-D-3’和G18．3．H．3’具有耐热性，其最适糖化温度为70℃，

4、最适糖化pH为pH4．5，分子量均约为50．0kD。关键词耐热糖化酶DE值糖化时间AbstractTwomutantsof9一l—Dand18-3一HfromAspergillusniger3．4309，whichproducedthermostableglucoamylasewereobtainedthroughdeterminationoftheirenzymeactivity．Andtheiroptimalreactiontemperatureswere60℃，whichwas10℃higherthanthatoftheoriginalstrain．At

5、theiroptimalreactiontemperature，theenzymeactivityoforiginalglucoamylasewasI31．23U／mg，thermostableglucoamylaseG9-1．Dwas171．10U／mg，whichwas30％higherthantheformerandthermostableglucoamylaseGIS．3．Hwas142．83U／rng，whichwas9％higherthantheformer．Ittook10hforthesaccharificationDEvalueoftherm

6、ostableglucoamylasesG9．1-DandG18-3-Htoreach70％at60℃，whichWas10hlessthanthatoftheoriginalglucoamylase．TlleoptimalsaccharificationtemperatureofGg-I-DandG18．3．Hwas70℃，andatthistemperature，ittook5hforthesaccharificationDEvalueofthermostableglucoamylasesG9．I-DandGjs-3．Htoreach70％，whichWa

7、s15hlessthanthatoftheoriginalglucoamylase．TheoptimalcompositeadditivesofthermostableglucoamylaseG9．．1．．Dwere50mmol／LNa十、0．05mol／Lglycerin、3g／Lxanthangum、2g／Lsodiumalginate．DEvaluecouldincreaserapidlyduringthesaccharificationwhenthecompositeadditiveswereaddedinto，thefinalDEvaluewere8

8、5．50％，7．86highertha