表皮生长因子复合可降解胶原膜防止鸡鞘管区肌腱粘连的实验-研究

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1、直塞查匿堂筮亟主堑塞圭兰焦鲨窒f；鲤i堡!o染色步骤①常规脱蜡至水。②3％H202室温lO分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。③1％胰蛋白酶消化20分钟，PBs(Pm．2—7．6)洗涤3分钟×3次。④滴加5％BsA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，不洗。⑤滴加I型或Ⅲ型胶原的一抗(浓度为1：loo)4℃过夜，PI强洗涤3分钟×3次。⑥滴加二抗，室温20分钟，PBs(肿．2—7．6)洗涤3分钟×3次。⑦滴加试剂sABc，室温20分钟，PBS(Pm，2—7．6)洗涤5分钟×4次。⑧DAB显色，蒸馏水洗涤。

2、⑨苏木素轻度复染。脱水、透明、封片。经上述步骤染色，I型及Ⅲ型胶原纤维被染成棕黄色。经图像分析仪测定各组之间I型及Ⅲ型胶原纤维在每高倍镜视野下所占面积的百分比，比较各组问I型及Ⅲ型胶原纤维的含量。1．4．3电镜观察：分别将各组动物腱缝合段相应部位取1mm长的组织块修成lmm×1mm×4mm的长条状，立即置于4％戊二醛中固定2天，1％锇酸后固定，逐级酒精脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，铀铅双重染色，电镜下观察各组腱缝合段成纤维细胞、胶原纤维的超微结构。1．5统计学方法实验所得数据以均数±标准差表示，用野髑

3、13，O软件处理，采用方差分析并进行组间两两比较，腱周粘连程度比较采用秩和检验，P值

4、腱周粘连度分级评定(例)H=lO．32PO．05；由上表可知：实验组(A组)和单纯胶原膜组(B组)的粘连度分级主要集中于II级和III级，而对照组的粘连度分级主要集中于Ⅳ级和v级，经秩和检验，P<0．05，认为三组间粘连程度不全相同。进一步作两两组问比较，可认为实验组(A组)和单纯胶原膜组(B组)的粘连程度明显较对照组(c组)轻，其差异有统计学意义(p<0，05)。尚不能认为A组与B组间差别有统计学意义(p>0．05)。以上结果提示胶原膜可能

5、起到防止粘连的作用。2．1．2关节屈曲总角度及肌腱滑移距离测定表2示术后4局关节总屈曲角度和胍踺可滑动距离的测量结果。从表牛数据可以看出，A组与B组的肌腱总屈曲角度和肌腱的可滑动距离，均明显优于对照组c组，经方差分析，计算F值，p

6、距离(i±s)表示与C组比较P<0．05；A组与B组比较P>005；正常组与A，B，c三组比较p值均

7、间隙，间隙的相对面可见复层扁平上皮细胞覆盖(见附图3HE染色a—d)；C组成纤维细胞数量明显较A、B两组为多，胞核体积大，腱周的成纤维细胞参与肌腱愈合，长入肌腱内部，肌腱与腱周无明显分界，形成致密的粘连(见附图3HE染色e—h)。2．2．2磷钨酸苏木素染色：正常组腱细胞数量少，胶原纤维粗大、排列整齐致密，呈波浪形(见附图4磷钨酸苏木素染色a、b)。A组可见成纤维细胞少，胞核呈梭形，体积小，成行排列，两行细胞之间为被染成玫瑰红色的胶原纤维，排列整齐、致密，略呈波浪状，形态接近于正常腱细胞，处于肌腱修复晚

8、期(见附图4磷钨酸苏木素染色c、d)；B组可见成纤维细胞排列整齐，胞核体积大，成行排列，胶原纤维呈玫瑰红色，纤细、成短节段状，排列稀疏，胶原之间可见明显的空隙，处于肌腱修复早期(见附图4磷钨酸苏木素染色e)。C组可见成纤维细胞数量明显增多，胞核圆形或椭圆形，体积大，胶原粗细不等、纵横交错、分布杂乱，腱周的成纤维细胞及胶原纤维长入肌腱内部与肌腱本身的胶原纤维交错排列，形成粘连，处于肌腱修复中晚期(见附图2磷钨酸苏木素染色f)。利用DJ一801图像分析系统计