发形霞水母触手提取物细胞毒性

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2、、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：互f

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4、}1日期：p7口年岁月易EI聊签名：?乜和日期：弘I『口年岁月哆日⑦第二军医大学硕士学位论文．土_‘．-J。刖舌水母属于腔肠动物门，是一个重要的海洋浮游生物类群，它种类多、数量大，分布广泛。水母的触手上分布着腔肠动物所特有的刺丝囊，其中含有大量的毒素成分。水母毒素蛋白是结构新颖独特的肽类毒素，具有多种生物活性，如细胞毒性、酶活性、神经毒性、皮肤坏死、肌肉毒性、肝脏毒性

5、以及心脏毒性等【l捌。水母蜇伤后绝大部分情况下会产生皮肤瘙痒、刺痛、红肿等局部症状，严重时可以导致呼吸、循环衰竭甚至死亡。。国外从20世纪60年代开始水母毒素的相关研究，但由于水母采集困难，毒素具有疏水性、热不稳定性、黏附性、易分解与聚集【3j等性质，分离纯化难度较大，毒素研究相关进展缓慢，明显滞后于其他常见有毒动物毒素如蛇毒、蝎毒素的研究。国内研究则主要集中在水母蜇伤后的临床症状及其治疗的病例报道上，实验研究较少。由于水母毒素毒性剧烈，活性广泛，受到较多研究人员的关注，其研究主要集中在水母毒素的急性毒性、药理特征及蜇伤救治方面的摸索。目前对水

6、母溶血毒性有了较深入的研究，已纯化并鉴定出5种水母溶血蛋白。发形霞水母(Cyaneacapillata)属刺胞动物I'-J(Coelenterata)钵水母纲(Scyphozoa)旗口水母目(Semaeostomeae)霞水母科(Cyaneidae)，系全球广布性大型水母，是我国东南沿海的主要致伤水母。近年来，水母爆发和水母蜇伤事件日益频繁，给海滨旅游业、近海渔业及水下作业带来极大的危害。我们实验室前期研究发现发形霞水母触手提取物TOE(tentacle．onlyextract)与刺丝囊毒素都具有明显的心脏毒性和细胞毒性，实验中用易于获得的TO

7、E代替刺丝囊毒素对水母毒素研究具有重要促进作用。C．capillataTOE对麻醉大鼠产生一个轻度而短暂的升血压反应后伴随剧烈的血压下降，直至循环衰竭而死-亡[4,51。另外，TOE对大鼠心电图、心率、左室发展压等生理指标及乳酸脱氢酶、肌酸激酶等生化指标都有明显影响，可见毒素急性作用引起的心肌收缩力剧烈下降所导致的急性全心衰竭是发形霞水母触手提取物致大鼠死亡的最基本的病理生理学变化，我们也从整体水平确定其心脏毒性是导致大鼠死亡的主要原因16，7l。而细胞毒性伴随TOE作用的整个过程，病理观察可看到心脏、肝脏、肺等部分器官有出血现象，心肌细胞损伤

8、，线粒体肿胀。对溶血活性也做了初步研究，分析了TOE浓度、温度和pH值等因素对溶血活性的影响【8】。本文为了进一步阐明水母毒素对细胞的直接杀伤作用，拟从TOE对血红细胞的溶细胞作用分析毒素的细胞毒作用，并扩展到心血管相关的原代VSMCs及其他几种肿瘤细胞，探讨水母毒素细胞毒性作用机制，为水母蜇伤致死原因提供更有力证据，对开发我国沿海水母蜇伤中毒的特异性药物和治疗方法具有重要意义。发形霞水母触手提取物细胞毒性第一部分发形霞水母触手提取物溶血活性研究·J■-o-●-一、刖舌按照作用机制可将海洋生物毒素中具有细胞毒作用的物质分为两大类。即：(1)使细

9、胞膜破坏或将其溶解；(2)抑制细胞大分子合成。前类海洋生物毒素可破坏细胞的活性结构，主要是破坏细胞膜或使之溶解，如各类溶细胞毒素(Cytolytictoxins)。后类海洋生物毒素为DNA或蛋白质合成的抑制剂，例如海参毒素(Holothurins)、膜海鞘素(Didemnins)及苔藓虫素(Bryostatins)等。对细胞毒素的毒性可藉用它们对靶细胞的致死能力而加以测定，其中最简便的方法是溶血测定(Haemolysisassay)，这是由于红细胞所丧失的血红蛋白容易被测定出来。溶血活性是水母细胞毒性检测最为简单易行的首选方法，作为水母毒素最为

10、普遍的毒性之一多有报道。2000年Nagai等【9'lol首次从Crastonii分离出溶血活性蛋白CrTX-A和CrTX．B以来，世界各地的科学家从