GBT5009.124-2003-食品中氨基酸的测定.pdf

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1、ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.124-2003代替GB/T14965-1994食品中氨基酸的测定Determinationofaminoacidsinfoods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部食众中国国家标准化管理委员会‘’.‘GB/T5009.124-2003前言本标准代替GB/T14965-1994《食物中氨基酸的测定方法》。本标准与GB/T14965-1994相比主要修改如下:—修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《食品中氨基酸的测定》;—按GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标

2、准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所。本标准主要起草人:贾健斌、赵熙和。原标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GB/T5009.124-2003食品中氨基酸的测定范围本标准规定了用氨基酸自动分析仪测定食物中氨基酸的方法.本标准适用于食品中的天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、绷氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸等十六种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol,本标准不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食品中氨基酸测定。2原理食品中的蛋白质经

3、盐酸水解成为游离氛基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与布三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色浏定氨基酸含量。3试荆3.1浓盐酸:优级纯。3.26mol/L盐酸:浓盐酸与水1十1混合。3.3苯酚:须重蒸馏。3.4(0.0025mol/L)混合氨基酸标准液(仪器制造公司出售)。35缓冲液3.5.1pH2.2的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠橄酸钠(Na,C6HSq，2H,O)和16.5mL浓盆酸加水稀释到Y。。。mL，用浓盐酸或500岁L的氮氧化钠溶液调节pH至2.2.3.5.2pH3.3的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠椒酸钠和12mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或500g

4、/L的氮氧化钠溶液调节pH至3.33.5.3pH4.。的柠橄酸钠缓冲液:称取19.6g柠椒酸钠和9mL浓盐酸加水稀释到1000mL，用浓盐酸或500g/L的氢载化钠溶液调节pH至4。。3.5.4pH3.3的柠檬酸钠缓冲液:称取19.6g柠檬酸钠和46.8g盆化钠(优级纯)加水稀释到1000mL，用浓盐酸或500g/L的氢氧化钠溶液调节pH至6.4.36苟三酮溶液场3.6.1pH5.2的乙酸铿溶液:称取氢氧化铿(LiOH"Hz0)168g,加人冰乙酸(优级纯)279mL，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或500g/L的氮氧化钠溶液调节pH至5.2.3.6.2苟三酮溶液:取150mL二甲基亚矾(C

5、ZHsOS)和乙酸诬溶液50mL加人4g水合荀三酮(CsHa仪·H2O)和0.12g还原荀三酮(GigHioOs·2HaO)搅拌至完全溶解。3.7高纯氮气:纯度99.99%.3.8冷冻剂:市售食盐与冰按1+3混合。4仪器和设备4.1真空泵。42恒温干燥箱。4.3水解管:耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20mL-30mL。用去离子水冲洗干净并洪干。4.4真空干燥器(温度可调节)。117GB/T5009.124-20034.5氨基酸自动分析仪。5试样处理试样采集后用匀浆机打成匀浆(或者将试样尽量粉碎)于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。6分析步骤6.1称样准确称取一定量均匀性好的试样如奶

6、粉等，精确到。.0001g,(使试样蛋白质含量在10mg-20mg范围内);均匀性差的试样如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的试样放于水解管中。6.2水解在水解管内加6mol/L盐酸10mL-15mL(视试样蛋白质含量而定)，含水量高的试样(如牛奶)可加人等体积的浓盐酸，加人新蒸馏的苯酚3滴^-4滴，再将水解管放人冷冻剂中，冷冻3min-5min,再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近0Pa)，然后充人高纯氮气;再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110℃士1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。打开水解管，将水解液过滤后，用

7、去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50mL容量瓶内用去离子水定容。吸取滤液1mL于5mL容量瓶内，用真空干燥器在40'C^-50℃干燥，残留物用1mL-2mL水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mLpH2,2的缓冲液溶解，供仪器测定用。7侧定准确吸取。.200mL混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5mL，此标准稀释液浓度为5.00nmol/50kL，作为上机测定用的氨基酸标