GBT6 432-1994-饲料中粗蛋白测定方法.pdf

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1、中华人民共和国国家标准饲料中粗蛋白测定方法GB/T6432一94Methodforthedeterminationofcrudeproteininfeedstuffs代替GB6432一66本标准参照采用[ISO5983-1979《动物饲料一氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。主腼内容与适用范围本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。引用标准GB601化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，

2、使含氮物转化成硫酸钱。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用砚酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。4试剂4.1硫酸(GB625):化学纯，含量为98%，无氮。4.2混合催化剂:0.4g硫酸铜，5个结晶水(GB665),6g硫酸钾(HG3-920)或硫酸钠(HG3-908),均为化学纯，磨碎混匀。4.3氢氧化钠(GB629):化学纯，40%水溶液(M/V)o4.4硼酸(GB628):化学纯，2%水溶液(MY).4.5混合指示剂:甲基红(HG3-958)0.1%乙醇

3、溶液，澳甲酚绿(HG3-1220)0.5%乙醉溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。4.6盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。4.6.10.1mol/L盐酸(HCl)标准溶液:8.3mL盐酸(GB622)，分析纯，注入1OOOMI蒸馏水中。4.6.20.02mol/L盐酸(HCl)标准溶液:1.67ml,盐酸(GB622)，分析纯，注入1OOOml蒸馏水中。4.7蔗搪(HG3-1001):分析纯。4.8硫酸钱(GB1396);分析纯，千燥。4.9硼酸吸收液:I%硼酸水

4、溶液1OOOmL，加入。I0o溟甲酚绿乙醇溶液10mL,0.1写甲基红乙醇溶液7mL,4%氢氧化钠水溶液。5mL,混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。仪器设备5.1实验室用样品粉碎机或研钵。国家技米监督局1994一07一18批准1995一01一01实施GB/T6432一945.2分样筛:孔径0.45mm(40目)。5.3分析天平:感量。，0001ge5.4消煮炉或电炉5.5滴定管:酸式，10,25mL,5.6凯氏烧瓶:250mL,5.7凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水燕气蒸馏式。

5、5.8锥形瓶:150,250mL,5.9容量瓶:100mL,5.10消煮管:250mL.5.1，定氮仪:以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动蛋白质测定仪。6试样的选取和制备选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。7分析步蕊了.，仲裁法7.1.1试样的消煮称取试样。5-1g(含氮量5^80mg)准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶(5.6)中，加入6.4g混合催化剂(4.2)，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸(4.1)和2粒玻璃珠，将

6、凯氏烧瓶(5.6)置于电炉(5.4)上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360^410℃)直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h,7门.2氨的蒸馏(蒸馏步骤的检验见附录A)7.1.2.1常量蒸馏法将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入60^-100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸(4.4)吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶(5.6)中加入50mL氢氧化钠溶液(4.3)，轻轻摇动凯氏烧瓶(5.6)，使溶

7、液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1-2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏.71.2.2半微量蒸馏法将试样消煮液(7.1.1)冷却，加入20mL燕馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置(5.7)的冷凝管末端浸人装有20mL硼酸(4.4)吸收液和2滴混合指示剂(4.5)的锥形瓶(5.8)内。蒸汽发生器(5.7)的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过

8、程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20mL注入蒸馏装置(5.7)的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液(4.3)，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶(5.8)使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流人锥形瓶内，然后停止蒸馏。注:7.1.2.1和7.1.2.2燕馏法测定结果相近，可任选一种。7.1.2.3蒸馏步骤的检验精确称取。.2g硫