GBT5511-1985-粮食、油料检验粗蛋白质测定法.pdf

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1、GB5511—1985中华人民共和国国家标准粮食、油料检验粗蛋白质测定法InspectionofgrainandoilseedsMethodsfordeterminationofcrudeproteinGB/T5511—1985本标准适用于商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定。1仪器和用具1．1凯氏烧瓶：50ml；1．2圆底烧瓶：100ml；1．3万用电炉；1．4锥形烧瓶：100ml；1．5微量滴定管：5ml、刻度0.01ml；1．6容量瓶：50ml；1．7移液管：5ml；1．8量筒：10ml；1．9洗耳球；1．10凯氏微量蒸馏装置（见下图）、胶管等。凯氏微量蒸馏装置图1—蒸

2、馏瓶；2—冷凝管；3—承接瓶；4—回流管；5—漏斗；6—活塞；7—簧夹；8—烧瓶2试剂2．1浓硫酸-过氧化氢-水混合液（2：1：3）：在100ml水中缓慢加入浓硫酸200ml，冷却后再国入30%过氧化氢300ml，混匀备用。此液存放阴凉处可保存一个月；2．2混合催化剂：硫酸铜（CuSO4·5H2O）10g，硫酸钾（A.R）100g，硒粉0.2g，在研钵中研细使通过40目筛，混匀后备用；国家标准局1985—11—02发布1986—07—01实施GB5511—19852．340%氢氧化钠溶液；2．42%硼酸溶液；2．50.01N盐酸溶液；2．6甲基红乙醇溶液：0.1g甲基红溶于

3、75ml95%乙醇中（先在研钵中加乙醇研磨）；2．7次甲基蓝乙醇溶液：0.1g次甲基蓝溶于80ml95%乙醇中。临用时将以上两液按2：1比例混合即成。在酸域呈紫红色，在pH5.5时溶液无色，在碱域呈绿色。3操作方法3．1消化按照含有10～30mg粗蛋白质计算试样用量，一般可称取试样0.2～0.3g（W，精确到0.0001g），用蜡光纸卷着倒入50ml凯氏烧瓶中，加混合指示剂1g，同时加入硫酸-过氧化氢-水混合液3～5ml，稍加振摇，斜置于电炉上，在通风橱内加热进行消化。开始时用低温加热，勿使瓶中泡沫超过瓶肚的三分之二，待泡沫减少和烟雾变白后再增加温度保持微沸。消化到溶液呈浅

4、蓝绿色的透明状时，再继续加热沸腾10min，取出待消化液冷却至室温后，加水10～20ml，再待溶液温度降到室温后，干净地转入50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用。3．2蒸馏按照凯氏微量蒸馏装置图的安装进行蒸馏和吸收。在烧瓶8内加水400ml和少量碎玻璃片，加5滴混合指示剂，加几滴酸液使水呈紫红色，连接4，1，2，并检查有无漏气处。量取30ml1%硼酸溶液注入锥形瓶3内，加混合指示剂2滴，使冷凝管下端插入液面下1cm处。量取稀释的消化液5ml，由漏斗5注入瓶1内，再加水10ml，冲洗漏斗5。量取40%氢氧化钠溶液1ml，提起活塞注入瓶1内，立即用水2～5ml冲洗漏斗5，

5、旋紧活塞。这时瓶1内溶液总体积不要超过其容量的一半。打开簧夹7，关闭活塞6，加热烧瓶8，待瓶1内溶液开始沸腾时开始计时，经2min降低瓶3，使冷凝管下端露出液面，再蒸馏1min后，用水冲洗管下端。蒸馏结束后，掐紧簧夹7，断绝蒸气，使瓶1内溶液全部吸入管4中，放松簧夹7，从漏斗5加入蒸馏水40～50ml，再通蒸气加热和回流，将瓶1洗涤一次备用。3．3滴定用0.01N盐酸溶液滴定瓶3中的吸收液，滴至溶液出现浅紫红色为止。为消除试剂误差，除不加试样外，按照上述操作方法，做一次空白试验。4结果计算粗蛋白质的干基含量按下列公式计算：5010000粗蛋白质（干基%）=(V−V)×N×1

6、4×P××10VW(100−M)式中：V——蒸馏时取用稀释的消化液体积，ml；V1——实验用去的盐酸溶液体积，ml；V0——空白试验用去的盐酸溶液体积，ml；N——盐酸溶液的当量浓度，N；14——每毫克当量盐酸相当于氮的毫克数；国家标准局1985—11—02发布1986—07—01实施GB5511—1985P——蛋白质换算系数（小麦5.7，其他谷物及豆类6.25）；W——试样重量，mg；M——试样水分百分率，%。双试验结果允许差：粗蛋白质含量在15.0%以下时，不超过0.2%；粗蛋白质含量在15.1%以上时，不超过0.4%。求其平均数，即为测定结果，测定结果取小数点后第一位

7、。注：①消化过程中，若硫酸损失过多时，可酌量补加硫酸，勿使瓶内干涸。②消化液加水稀释后，应及时进行蒸馏，否则应保存消化液，临用时加水稀释。③加入蒸馏瓶1内的碱液，必须过量。④也可使用由0.2%甲基红乙醇溶液1份和0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份配制的混合指示剂（临用时混合），终点为灰红色。附录A大豆水溶性蛋白质测定法（补充件）A．1仪器和用具A．1．1粉碎机；A．1．2磨口带塞锥形瓶：500ml；A．1．3振荡器：国际型；A．1．4容量瓶：250ml；A．1．5离心机，附50ml离心管；A．1．6玻璃漏斗；A．1．7锥