新型多孔pva及其复合物修复兔膝关节骨软骨缺损的实验研究

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1、四川大学博士学位论文中英文缩略词表MSCsMcs,mchymalstemcells问充质干细胞DMEMDulbecco’smodifiedeaglemediumDulbccc改良的MEM培养基TNTrypsinase．胰蛋白酶FBSFetalbovinesemm胎牛血清FCSFetalcalfserum小牛血清PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲盐水PVAPoly(vinylalcoh01)聚乙烯醇PVA／n-HAPoly(vinylalcoh01)／nano-Hydroxyap

2、atite聚乙烯醇／纳米羟基磷灰石PVA／CsPoly(vinylalcoh01)／chitosan聚乙烯醇／壳聚糖PVA／GelPoly(vinylalcoh01)／gelatin聚乙烯醇／明胶EDTAEthylenediaminetetmaceticacid7,_--胺四乙酸SEMScanningelectronmicroscope扫描电镜lL．1．Interleukin-1白介素一1IL．6Interleukin．1白介素一6MTr3-(4，5-dimethylthiazol一2-y1)-2，5-d

3、iphenyltetrazoliumbromide溴化-3羽，5．2qt基噻唑基．2)-2，5-二苯基四唑PLAPoly-lacticacid聚乳酸PGAPoly-glycolicacid聚羟基乙酸7声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一起工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本

4、学位论文是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。申请人：指导教师：二00七年四月二十日四川大学博士学位论文新型多孔PVA及其复合物修复兔膝关节骨软骨缺损的实验研究研究生吴佳奇导师杨天府教授摘要目的探讨软骨微环境对MSCs的影响，研究多孔聚乙烯醇(P、，A)及其复合物的性能与生物相容性，初步观察新型骨软骨一体化多孔材料、聚酰胺66／纳米羟基磷灰石(PA66／n-HA)、聚乙烯醇／明胶(PvA／Gcl)修复兔膝关节骨软骨缺损的效果。方法①以兔关节软骨细胞和软骨细胞回收液模

5、拟软骨微环境，并与MSCs进行单层共培养，采用镜下观察、组织学染色、II型胶原原位杂交的方法观察其相互影响．②采用乳化发泡—冷冻固化一去除表面活性剂法获得多孔PVA、PVA，玎．HA、PVA／Gel和聚乙烯醇，壳聚糖(PⅥ～／Cs)。并采用图像分析、力学测试、MTf法、流式细胞仪、ELISA法、与MSCs复合培养法、肌肉植入实验检测材料性能和生物相容性。③以多孔PVA或PVA／n-HA为上层材料，多孔PA66／n-HA为下层材料，制得一体化多孔材料PVA／PA66／n-HA和PVA／n．HA／PA66／n

6、．HA，采用撕裂试验观察上下层间的结合强度，并植入兔膝关节骨软骨缺损处观察其修复效果。④以PA66／n-HA复合MSCs略低于周围软骨平面植入骨软骨缺损处，观察其修复效果。⑤以Tween20为致孔剂制得多孔PVA／Gel，并植入兔膝关节缺损处，2周后，行第2次手术注射MSCs到材料上，观察其修复效果。结果(!)MSCs与软骨细胞共培养可以发生相互影响，当MSCs与软四JIf大学博士学位论文骨细胞比例为2：1时，对维持软骨细胞外基质的分泌和促进软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达是较有利的：软骨细胞的培养回收液可

7、以引起MSCs形态上的轻度类软骨样改变和诱导MSCsII型胶原mR．NA的强表达，但细胞有肥大现象；MSCs回收液则对软骨细胞II型胶原表型的维持有一定作用。②制得的多孔PVA及其复合物，亲水性好。有100～300pm的大孔和10pm以下的微孔两级孔结构，孔与孔之间相互相互贯通，孔隙率在80％左右，有一定韧性和弹性。MTT法、肌肉植入、ELISA法、流式细胞仪检测表明，材料清洗3天，会有一定的表面活性剂(0P)残留，对材料生物相容性有一定负面影响；PVA复合物中以PVA／Gel、PVA／n-HA、PVA的

8、生物相容性较好，其中，PVA／Gel与MSCs黏附较好，PVA／Cs也能与MSCs黏附，但肌肉植入该材料早期炎性反应较重，且在体外对软骨细胞增殖不利。③一体化多孔PVA／PA66／n-HA上下层之间的结合强度约4．00-a：2．21N．植入膝关节4月后，PVA／n．HA／PA66／n．HA的软骨修复效果优于P、璐，PA66，n-HA，两组的下层材料均有胶原和骨组织长入。+④以PA66／n-HA复合MSCs植入骨软骨缺损处，并略