【硕士论文】高效液相色谱与化学发光联用技术在药物分析中的应用.pdf

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1、高效液相色谱与化学发光联用技术在药物分析中的应用魏月摘要本论文概述了高效液相色谱与化学发光联用技术在药物分析中的应用，主要由两部分组成。第一部分为综述，介绍了高效液相色谱、化学发光及高效液相色谱化学发光联用技术。重点对高效液相色谱化学发光联用技术作了综述，涉及高效液相色谱化学发光检测器的原理、仪器结构，典型化学发光反应体系以及对该技术的应用和发展做了概述。，第二部分为研究报告，包括如下四个部分：(一)高效液相色谱—化学发光法测定淫羊藿甙在碱性条件下，研究了淫羊藿甙与Co(II)形成l：1配合物催化lumin01．H202体系产生化学发光。基于此，建立了反相高效液相色谱(RP，HPLC

2、)分离柱后化学发光检测淫羊藿甙的新方法，并成功地应用于安神补脑液中淫羊藿甙的测定。方法的线性范围为0．5-20pg／mL，相关系数0．9986，检出限为2×1079／mL(30)。对2x10‘g／mL淫羊藿甙平行测定11次，相对标准偏差为4．5％。(二)高效液相色谱-化学发光法研究人血清中的甲硫氧嘧啶和丙硫氧嘧啶在酸性条件下，KMn04氧化丙硫氧嘧啶和甲硫氧嘧啶可产生化学发光，甲醛的存在对于这一化学发光反应具有增敏作用，基于此设计了一个经高效液相色谱(HPLC)分离柱后同时检测人血清中甲硫氧嘧啶和丙硫氧嘧啶的化学发光检测器。研究并优化了流动相、流速以及化学发光检测的条件。该方法测定甲

3、硫氧嘧啶和丙硫氧嘧啶的线性范围分别为O．2-20ggmL"1，O．2-10ttgmL～，其检出限：甲硫氧嘧啶为0．08咤mLl，丙硫氧嘧啶为O．08ggmL"1，测定的相对标准偏差为43％，3．9％(c=1．Oxl069／mL，n=11)。该方法已成功地用于同时测定人血清中的甲硫氧嘧啶和丙硫氧嘧啶。(三)高效液相色谱．化学发光法测定美白化妆品中维生素C和熊果苷首次建立了高效液相色谱化学发光法同时测定熊果苷和维生素c，该法基于高锰酸钾在酸性溶液中可氧化熊果苷和维生素C产生微弱的化学发光，而甲醛可以大大增强该体系发光强度。本方法以Cls反相键合相为色谱柱，用0．02mol／L磷酸缓冲液：

4、甲醇(90：10，V，v)为流动相，实现了对美白化妆品中维生素c和熊果苷的分离与测定。在最适宜条件下，该方法测定维生素C和熊果苷的线性范围分别为1-200I．tgmL～。0．5—50．gmL～，其检出限：维生素C为0．3lagmL～，熊果苷为0．2烬mL～，测定的相对标准偏差分别为4．5％和3．7％(c=1．0x1049／mL，n=11)。(四)高效液相色谱．化学发光法测定盐酸阿魏酸赈嚷在碱性条件下盐酸阿魏酸哌嗪对luminol—Nal04发光体系有强烈的抑制作用。基于此建立了新的测定盐酸阿魏酸哌嗪的方法。本方法以Cls反相键合相为色谱柱，用甲醇和水(35：65，V／V)为流动相，实

5、现了对入尿样中盐酸阿魏酸哌嗪的分离与测定。方法的线性范围为1．20mg／L，检出限为O-3mg／L，相对标准偏差为3．O％(c=2．0x10石g／mL，n=l1)。关键词：高效液相色谱化学发光药物分析Il第一部分综述高效液相色谱化学发光检测技术的研究进展l引言高效液相色谱法(HPLC)又称高压色谱分析，是20世纪70年代发展起来的一种分离分析技术。它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论和技术，以高压输送流动相，采用高效固定相及较高灵敏度检测器发展而成的现代液相色谱分析方法。高效液相色谱分析，根据分离机制的不同，可分为以下几种类型：液固色谱、液液色谱、离子交换色谱、离子对

6、色谱、亲和色谱、电色谱等。其中，液液色谱中的反相色谱应用较多，占高效液相色谱的70％-80％。高效液相色谱具有以下突出的特点【l】：(1)高压高效液相色谱以液体作为流动相，这种液体称为载体。由于载液流经色谱柱时，受到阻力较大，为了使载液迅速通过色谱柱，必须对载液施加高压，压力一般达1．52X10-43．04×104kpa。(2)高速高效液相色谱由于采用了高压，载液流速快，因而所需的分析时间较之经典液体色谱法少得多。(3)高效高效液相色谱法的柱效很高。(4)高灵敏度由于采用高灵敏度的检测器，最小检测量可达104，而所需试样量较少。这些特点使得高效液相色谱达到了和气相色谱法(GC)相媲美

7、的程度，在挥发性低、受热易分解的以及极性强的农药组分监测中HPLC比GC更为适用且弥补了GC法的不足。90年代后HPLC技术发展很快，液相色谱与其它仪器的联机技术有了很大的发展，使HPLC的应用前景更为广阔。高效液相色谱仪如图1所示。是由溶液贮器、高压泵、进样系统、色谱分离柱、检测器和数据处理系统几部分组成。由流程图l可以看出系统由储液器、泵、图I．高效液相色谱仪结构示意图Fig．1SchematicdiagramoftheHPLC进样器、色谱柱、检测器、