内耳免疫反应中细胞凋亡及caspase-3表达的研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．论文作者签名：显狐日期：2五：6：竺中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学．本人

2、保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：·中文论著摘要·内耳免疫反应中细胞凋亡及Caspase一3表达的研究自身免疫性内耳病(autoimmuneinnerCalfdisease，ALES)是一种新的疾病实体，是目前少数几种经恰当治疗可获得较好疗效的内耳病之一．研究证实凋亡是许多内耳疾病发生、发展的共同基础

3、之一，其中Caspase-3是关键的效应分子，它能使许多与细胞结构细胞周期及DNA修复等相关的蛋白或激酶失活，从而使细胞凋亡。本试验建立了Ⅱ型胶原诱导产生的大鼠自身免疫性内耳病模型，探讨内耳免疫反应与凋亡之间的相关性，从而为预防和治疗自身免疫性内耳病探索一条可行之路。目的建立II型胶原诱导产生的大鼠自身免疫性内耳病模型，研究内耳免疫反应中是否存在凋亡，以及细胞凋亡是否与Caspase-3信号转导有关。方法选用耳廓反射灵敏的健康雌性SD大白鼠60只，随机分成实验组、佐剂组和对照组。其中实验组30只，首次皮下注射Ⅱ型胶原(400微克)与完全弗式佐剂(completefreundadj

4、uvant，CFA)的乳浊液0．2ml，以后每周皮下注射II型胶原(200微克)与不完全弗式佐剂(incompletefreundadjuvant，IFA)的乳浊液0．1ml。佐剂组15只，首次皮下注射CFA0．2ml，以后每周皮下注射IFA0．1ml。对照组15只予以等量生理盐水。免疫六周后，观察两周，于首次给药前一天和末次给药后一天行畸变产物耳声发射榆测(distortionproductotoacousticemission，DPOAE)；末次畸变产物耳声发射检测结束后取眼内眦血行血清学检测；处死动物，取耳蜗行基底膜铺片光学检查；取耳蜗做冰冻切片通过TUNEL法检测内耳凋亡

5、细胞，免疫组化检测内耳Caspase．3的表达。结果1、DPOAE幅值检测免疫后，实验组部分鼠DPOAE幅值在1、2、4、6、8kHz较用药前明显下降(P

6、渐加重；对照组、佐剂组及实验组中未出现听力下降者可见毛细胞排列规整，细胞间隔均匀，纤毛清晰。边界清楚，基本正常。4、免疫组织化学染色结果免疫成模组动物切片Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带上都有较强的Caspase-3蛋白表达；佐剂组、对照组及免疫未成模组Caspase-3表达阴性。5、TUNEL染色结果免疫成模组Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带上均可见TUNEL阳性细胞；Corti器中TUN-EL阳性细胞主要见于外毛细胞和支持细胞；对照组、佐剂组及免疫未成模组切片仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞。结论1、内耳免疫反

7、应可以诱导细胞凋亡的发生。2、内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase．3的激活。关键词自身免疫：内耳；细胞凋亡；Caspase．32·英文论著摘要·AStudyonApoptosisandCaspase-3ExpressionintheImmuneResponseofInnerEarAIEDiSanewkindofdisease，oneofafewinnereardiseasesWhichcanbecurediftreatedproperly．Studyshowstha