hif-1α在缺氧%2f复氧性hk-2细胞损伤中作用及丹参干预的研究

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1、泸州医学院硕士学位论文HIF-1α在缺氧/复氧性HK-2细胞损伤中作用及丹参干预研究姓名：郭琳申请学位级别：硕士专业：儿科学（新生儿）指导教师：董文斌20070501泸州医学院研究生硕士论文英汉缩略词对照表HIF．1aHypoxiainduciblefactor-1apha缺氧诱导子-1a缺氧复氧HK-2Humanrenalproxiarnaltubularcells人肾近曲小管上皮细胞PBSPhosphatebuffersalineDMSODimethylsulfoxide乳酸脱氢酶磷酸缓冲盐溶液二甲基亚砜氧依赖降解结构域CTADC-terminal们m曲vationdomai

2、nC末端转录激活结构域NTADN．terminaltransactivationdomainN末端转录激活结构域促红细胞生成素VEGFVascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子HO．1iNOSHemeoxygenase-1血红素加氧酶-1Induciblenitricoxidesynthase‘诱导型NO合酶TNF．0【Tumornecrosisfactor-a肿瘤坏死因子．仅几．1Interleukine．1第．1-页共59页白细胞介素．1核因子心泸州医学院研究生硕士论文泸州医学院硕士研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在

3、导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：彳群签字日期：文∥]年g-,9心El泸州医学院学位论文版权使用授权书本人完全了解泸州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：泸州医学院有权保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权‘泸州医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存学

4、位论文，即：泸州医学院具有学位论文的数字化制品复制权，信息网络传播权和汇编权。保密的学位论文在解密后适用本授权书。学位论文作者签名：奇琳导师签名：磊主§扒签字日期：文川年r月侈El签字日期：妒。7年j月I厂日第．59．页共59页泸州医学院研究生硕士论文HIF．1a在缺氧／复氧性HK．2细胞损伤中作用及丹参干预研究四川泸州医学院附属医院新生儿科研究生郭琳导师董文斌教授中文摘要背景和目的：缺氧诱导因子一l(hypoxiainduciblefactor-1,HIF一1)是1992年Semenza对经缺氧处理的Hep3B和HepG2细胞株的核提取物进行电泳位移分析时首先被发现的，是细胞在

5、缺氧条件下产生的具有转录活性的核蛋白，能与靶基因结合，通过转录和转录后调控使机体对缺氧、缺血产生适应性反应。HIF．1的发现使人们对缺氧缺血状态下机体各种应答反应机制的研究更加深入。近几年，HIF．1在肾脏中的作用也逐渐受到人们的关注。肾脏对于缺氧是非常敏感的。肾脏缺氧缺血性损伤是围产期窒息、肺炎、肾脏移植和肾脏手术等临床共同面临的问题。在缺氧、缺血状态下可诱导HIF．1表达的增加，HIF．1能启动下游基因表达上调，在促进糖酵解，有效利用氧，红细胞增生及葡萄糖转运体增加等方面，HIF．1参与了缺氧细胞的能量代谢及氧利用障碍发生机制，对肾脏细胞具有明确的保护效应。‘肾小管上皮细胞及

6、其肾小管周围成纤维细胞不仅是构成肾小管间质结构的主要细胞，还是肾脏病变的重要生物学基础。由于肾损伤最早的第．2．页共59页泸州医学院研究生硕士论文部位即肾小管，肾小管上皮细胞不仅是缺氧／复氧时的靶细胞，还是造成损伤进展的主要参与者。我们在前期建立人近曲肾小管上皮细胞(瞰．2)缺氧／复氧的损伤模型基础上，探讨HIF．1a在肾脏缺氧／复氧性损伤中的表达规律，探讨其表达的意义。众多实验研究表明：中药能较好地抗缺氧／复氧的损伤，具有良好的应用前景。其中，丹参是尤为受到广泛关注的中药。已有研究表明，丹参对缺氧／复氧性损伤具有显著的保护作用。我们在前期建立人近曲。肾小管上皮细胞(腿．2)缺氧

7、／复氧的损伤模型基础上，研究丹参对缺氧／复氧损伤的HK．2细胞中HIF．1a表达的影响，来探讨丹参的保护作用与HIF．1a表达之间的关系。方法：(1)以人近曲肾小管上皮细胞(II]K．2)为研究对象；(2)采用液体石蜡覆盖法建立缺氧／复氧模型，其中丹参组在覆盖石蜡的同时加入丹参注射液，丹参注射液(生药浓度为lml含丹参lg)终浓度选为已证实为最佳有效浓度O．1％；(3)实验分为三个组：第一大组为正常对照组；第二大组为模型组；第三大组为丹参组。每组都包括Hlh、H4h、H8h、H1