《GBT17999.2-1999-SPF鸡血清中和试验》.pdf

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1、GB/e17999.2--1999前言本标准参照美国SPAFAS公司的血清中和试验(SN)操作规程编制而成。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF鸡血清中和试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以F部分:GB/T17999.1-1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.3--1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/丁17999.4-1999SPF鸡琼脂扩散试验;GB/T17999-5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验;GB/T17999.6一1999SPF鸡胚敏感试验;GB/T1

2、7999.7-1999SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;GB/T17999.8--1999SPF鸡试管凝集试验;GB/T17999.9-1999SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准山中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出本标准由农业部畜牧兽医司归n本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所本标准主要起草人赵立红、陈德威、张秀美、秦卓明。中华人民共和国国家标准GB/T17999.2-1999SPF鸡血清中和试验SPFchicken-Serumneutralizationtest范围本标准规定了血清中和试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用fSP

3、F鸡感染以下病毒后的中和抗体的监测:禽脑脊髓炎病毒(AvianEncephalomyelitisVirus)、传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)、传染性喉气管炎病毒(InfectiousLaryngotracheitisVirus)、传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus),2原理中和试验系指有生物活性的病毒与相应的抗体结合后，可失去原有的生物活性的中和反应。中和反应不仅有高度特异性，巨具有严格的量的关系。因此可用中和试验鉴定病毒，也可用于相应抗体的定量检测。3试剂和器材3.1试剂3.1.1蛋

4、白肪磷酸肉汤。3.1.2青霉素/链霉素(双抗)液。3.1.3300碘溶液。3.1.4SPF蛋3.2器材I2门蛋钻(打孔器)。3.2.26'‘针头。3.2.37:'针头。3.2.4混合器。I2.5照蛋器。3.2.6常规实验设备。4操作程序4门试验准备4.1.1血清样品处理被检血清和阳性对照血清经56C30min--45min灭活，保存于一20C条件下备用。4.1.2SPF蛋准备4.1.2.1共需12枚蛋4门.2.2照蛋检查胚体活力，试验只用健康胚4.1.2.3根据病毒种类选择篷f日〕兰丝立竺塑垫迎些逛鱼塑迷鱼喳堕二一国家质量技术监督局1999一11一10批准2000一0

5、4一01实施GB/'r17999.2-1999表1病毒接种胚龄与方法病毒胚龄,a接种方法禽脑脊髓炎病毒5-7Ys传染性支气管炎病毒9-11CAS传染性法氏囊病病毒10CAM传染性喉气管炎病毒9-11CA片注;YS一卵黄囊;CAS尿囊腔瓜AM绒毛尿囊膜。4.1.3稀释病毒4门.3门取灭菌试管4支一9支，每管加入稀释液4mL,青霉素/链霉素液。.5ml-4.1.32第1管加入病毒液。.5mL，作连续10倍稀释。各种病毒的稀释度参照表2e表2病毒稀释病毒稀释度一-禽脑脊髓炎病毒10-'-10-1传染性支气管炎病毒1o一10，传染性法氏囊病病毒10-1-101传染性喉气管炎病

6、毒1o-‘-10-14.2中和试验4.2.1每份被检血清需1.5ml。4.2-2病毒稀释度选择根据具体情况决定，一般选择3个连续的病毒稀释度。检测SPF鸡血清样品时，病毒稀释度，采用较高稀释度，如10-1-1。一‘;检测阳性对照血清样品时，病毒采用较低稀释度，如10-‘一10-1;检测普通鸡血清样占占时，病毒稀释度常采用103_10-1.4.2.3病毒与血清混合感作将血清与不同稀释度的病毒等量混合后，经室温(18'C-22'C)感作，感作时间见表3,劣3而清与病毒混合赚作时间病毒感作时间，min一一禽脑脊髓炎病毒60传染性支气管炎病毒30或60传染性法氏囊病病毒传染性

7、喉气管炎病毒::4.2.4接种鸡胚4.2.4门病毒与血清混合感作后接种鸡胚，每个稀释度接种A枚鸡胚，每枚鸡胚接种。2mLo4.2.4.2病毒对照:将不同稀释度的病毒液，分别接种鸡胚，每个稀释度接种4枚鸡胚，每枚鸡胚接种o.]ml4.2.5孵化将接种后的鸡胚放入孵化器，继续孵化。根据病毒不同，选定不同的孵化时间(见表4)表4接种鸡胚的孵化时间记录各组死亡鸡胚数，接种禽脑脊髓炎病毒的鸡胚，若胚胎经刺激无反应时，按死亡鸡胚记录‘2.762GB/T17999.2-19994.2.7计算中和指数结果以中和指数表示，中和指数表示被检血清中有无中和抗体及中和病毒的