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时间:2019-01-30
《hbv感染不同状态下树突状细胞生物学的的研究论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、摘要目的树突状细胞(dendriticcells,DCs)是一种最具潜能的抗原提呈细胞,其对抗原进行捕获、加工,处理后提呈给组织相容性复合物(majorhistocompabilitycomplex,MHC).I、II类分子,诱导T淋巴细胞的增殖,在增强或调节细胞介导的免疫反应中起着决定性作用。乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染者DCs的相关研究目前愈来愈受到众多学者的关注。本课题拟研究慢性乙型肝炎不同感染阶段外周血来源DCs的功能特点,比较DCs中HBV不同滴度时DCs的功能差异,并研究CpG0DN能否促进DCs成熟,增强DCs功能,
2、从而进一步揭示HBV感染不同状态下DCs的免疫功能。方法本研究对10例慢性乙型肝炎患者、10例HBV携带者及lO例健康对照者外周血来源DCs进行体外培养,应用流式细胞技术检测DCs的表面分子HLA.DR、CD80、CD86的表达,ELISA检测DCs培养上清IL.12水平,以比较DCs在慢性乙型肝炎不同感染阶段的功能特点;同时运用荧光定量PCR的方法,对12例慢性乙型肝炎血清HBV。DNA阳性患者及10例血清HBV—DNA阴性患者外周血来源DCs内的HBV.DNA进行了检测,并比较DCs中HBV不同滴度时DCs的功能差异;通过予以含非甲基化CpG基序的寡脱氧核
3、苷酸链(unmethylatedCpGmotifcontainingoligodeoxynucleotides,CpGODN)干预,研究CpGODN能否有效促进DCs成熟,增强DCs功能。厶七甲"171木(1)实验结果显示,体外用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI.1640完全培养基(iJHGM.CSF矛NIL一4)诱导人的外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)来培养DCs,24小时后可见贴壁单核细胞聚集成大小不等葡萄串状,粘附于培养板底,第3天可见这部分细胞体积增大,第4天可见部分细胞悬浮于细胞培养液
4、,第5天可见这部分细胞数目增多,部分细胞出现许多毛刺。第7天培养液中飘浮着大量有明显树突状的大个细胞或细胞团。将培养7天的DCs收集在透射电镜下观察,每个视野充满DCs,可见细胞体积较大,细胞表面突起比较丰富,胞浆内粗面内质网丰富,线粒体结构较清楚,溶酶体丰富,核大而圆,核膜清晰,染色质分布较均匀。慢性乙型肝炎患者及HBV携带者HLA.DR、CD80和CD86的表达率较正常对照组普遍降低,但HLA.DR、CD80和CD86的表达水平在慢性乙型肝炎患者及HBV携带者之间的差异无统计学意义。ELISA检测培养第7天DCs上清IL.12水平,发现在DCs培养上清液中
5、,IL.12的表达水平在慢性乙型肝炎患者及携带者明显低于正常人,而慢性乙型肝炎患者与携带者之间则无明显差异。(2)对12例慢性乙型肝炎血清HBV—DNA阳性患者及10例血清HBV.DNA阴性患者外周血来源DCs内的HBV.DNA进行检测发现:12例血清HBV—DNA阳性患者,其中有7例其DCs内可检测到HBV.DNA,5例DCs内未检出HBV.DNA,DCs内HBV.DNA检出率为58.3%。流式细胞仪分析显示,正常人的皿A.DR、CD80和CD86的表达阳性率均在58%以上,而慢性乙型肝炎血清HBV-DNA阳性组及血清HBV-DNA阴性组HLA—DR、CD8
6、0和CD86的表达率较正常人组普遍降低,尤以血清HBV-DNA阳性组下降更为明显。7例DCsHBV-DNA阳性组及15例DCsHBV-DNA阴性组甩A.DR、CD80和CD86的表达率亦较正常II人组普遍降低,尤以DCsHBV-DNA阳性组下降更为明显。DCs培养上清IL.12水平在血清HBV-DNA阳性组明显低于血清HBV-DNA阴性组及正常人组,血清HBV-DNA阳性组又低于血清HBV-DNA阴性组。而IL.12的表达水平在DCsHBV-DNA阳性组明显低于DCsHBV-DNA阴性组及正常人组,DCsHBV-DNA阴性组又低于正常人组。相关分析显示,DCs
7、表面分子的表达及DCs分泌IL一12水平与血清及DCsHBV载量均呈显著负相关。(3)将培养第6天的DCs,加入CpGODN继续培养24d,时后,透射电镜观察CpGODN刺激后DCs与完全培养基对照组DCs相比,其表面的突起丰富、增粗,粗面内质网增多,空泡减少甚至消失。用流式细胞仪分析显示,CpGODN束U激组CD80、CD86及HLA.DR的表达阳性率在慢性乙型肝炎组、HBV携带者组及正常人组均完全培养基对照组明显升高。完全培养基对照组甩A.DR、CD86、CD80的表达阳性率在慢性乙型肝炎组、携带者组及正常人组之间比较发现:慢性乙型肝炎组及携带者组HLA.
8、DR、CD86、CD80的表达阳性率较
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