标记血管紧张素ⅱ的合成

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1、硕十学位论文I：：：]圈···············，，Y、NIHoHoH图1-2多肽的l占

2、相合成过程Fig．1-2TheprocessesofSPPS在温和反应条件下，肽合成过程是通过活化一个氨基酸的羧基部分，第二个氨基酸则亲核进攻活化的羧基部分而形成二肽，如果羧基组分的氨基未保护，肽键的形成则不可控制，可能形成线形肽和环肽等副产物，与目标化合物混在上／I硕士学位论文一起。所以在肽合成过程中，为了得到理想的目的肽，首先需要对其中一个氨基酸的羧基和另一个氨基酸的氨基进行封闭或保护，同样的，如果所用氨基酸的侧链(R1和R2中)上有影响反应的活性官能团，

3、也需要对这些活性基团加以封闭或保护。根据氨基酸保护基的不同，多肽固相合成方法可以分为两大类：Boe方法和Fmoc方法。这两种方法的合成原理基本相同，但由于保护基有差异，后面所应用的一系列试剂、条件等都发生了相应的改变。1．1．1．1Boc(叔丁氧羰基)多肽固相合成法Boc合成法是经典的多肽固相合成法，B．Merrifleld在合成血管舒缓激肽时，就是应用Boc作为a．氨基酸的保护基。Boc合成法是采用TFA(-一氟乙酸)可脱除的Boc为a．氨基保护基，侧链保护采用苄醇类。合成时将一个Boc．氨基酸衍生物共价交联到树脂上，用TFA脱除Boc，用三乙胺中和游

4、离的氨基末端，然后通过DCC活化、耦联下一个氨基酸，最终脱保护多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。到目前为止，用Boc法已成功地合成了许多生物大分子，如活性酶、生长因子、人工蛋白等。在Boc合成法中，反复地用酸来脱保护，这种处理带来了一些问题：如在肽与树脂的接头处，当每次用50％TFA脱Boc基时，有约1．4％的肽从树脂上脱落，因此，合成的肽越大，这样的丢失越严重；此外，酸催化会引起侧链的一些副反应。Boc合成法尤其不适于合成含有色氨酸等对酸不稳定的肽类。经过查阅大量的资料发现，现在Boc合成法的使用率不高，正逐渐被Fmoc方法所替代，但是Boc法

5、本身的优点还是不容忽视，有些方面值得我们借鉴和应用。如澳大利亚科学家L．Mirandat3】等在利用“化学选择连接”法合成蛋白质时，选择Boc方法合成组成蛋白质的各个片段。与Fmoc方法相比，他们认为Boc方法更干净、更可靠，更能快速去除仅一氨基保护基。Fmoc合成法则过度依赖于肽序列，并且不易完全去除a一氨基的保护基。1．1．1．2Fmoc(9一芴甲氧羰基)多肽固相合成法R．B．Merrifield曾报道，固相多肽合成由于反应的不完全，导致副反应产物的积剥41，他期待固相多肽合成法的进一步完善。不负他所望，经过四十年的历程，固相多肽合成法已经得到了很大

6、程度的改善。1978年，Chang、Meien．10fer；F-tlAtherton等人采用Carpino【5】报道的Fmoc(9．芴甲氧羰基)基团作为0【．氨基保护3硕+学位论文基，成功地进行了多肽的Fmoc固相合成。Fmoc法与Boc法的根本区别在于采用了碱(常用哌啶)可脱除的Fmoc为a．氨基的保护基，侧链的保护采用TFA可脱除的叔丁氧基等，树脂采用90％TFA可切除的对烷氧苄醇型树脂和I％TFA可切除的二烷氧苄醇型树脂，最终的脱保护避免了强酸处理，如图1．3所示。同时，Fmoc基团有特征性的紫外吸收(k戤=267m)，易于检测控制反应的进行【3，

7、61，因此，越来越受到人们的青睐。i*够A夥媛：：‰，燃绉影锈僦绷绣鳓肇嚣猫9蟛》}l露珏每纠。一办p。弋>嘶鳓懒r鲇磁貉勃锄嬲￡蜥删槔锄媳黔图1．3Fmoc法二肽合成中氨基酸保护和脱保护Fig．1-3TheFmocstrategyillustratedforthesynthesisofadipeptide在合成具体蛋白质时，根据蛋白质所含有的具体的氨基酸，应该选择与之相适应的树脂，第一个氨基酸与树脂结合率的高低将直接影响目的肽的最终合成量。因此在合成结构较复杂的蛋白质时，可以将Boc方法和Fmoc方法结合使用。1．1．2氨基酸的保护与脱保护策略1．1．

8、2．1a．氨基的保护在选择氨基酸保护基时，要充分考虑反应选择性的问题，即a．氨基保护基团和c‘．羧基保护基团是暂时性保护基团，当一个氨基酸结合到肽链上后，暂时性保护基要能立刻脱除。因此，暂时性保护基必须符合下列要求：1)引入保护基后的氨基酸衍生物不再保持两性离子结构状态；2)脱保护时，不能破坏半永久性保护基或肽键的稳定性；3)在所有必要的操作过程中，不能发生消旋；4)必须有利于保护中间体的稳定性和表征；5)必须有利于保护氨基酸的溶解性。而侧链保护基团是“永久性"保护基团，在肽的合成过程中不会受到反应物的影响，不发生反应，当肽合成结束后，所有保护基都要脱除

9、并且脱除过程不会影响目的肽的结构和性能，所以侧链保护基团的稳定性要大于Q．氨基保