镉致实验红鲫aflp和ssr标记多态性改变的分析

《镉致实验红鲫aflp和ssr标记多态性改变的分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、中英文缩略词缩写英文全称中文译名AFLPAmplifiedFragmentLengthPolymorphism扩增片段长度多态性CdCl2Cadmiumchloride氯化镉EBEthidiumbromide溴化乙锭Hgenediversity基因杂合度LC50MedianLethalConcentration半数致死浓度NaObservednumberofalleles等位基因数目NeEffectivenumberofalleles有效等位基因数目NpNumberofpolymorphicloci多态性位点数目PCRPolymeras

2、eChainReaction聚合酶链反应PICPolymorphisminformationcontent多态性信息含量RAPDRandomamplifiedpolymorphic随机扩增多态性DNARFLPRestrictionfragmentlengthpolymorphism限制性酶切片段长度多态性rpmrevolutionsperminute每分钟转数SSRSimpleSequenceRepeat微卫星序列1万方数据镉致实验红鲫AFLP和SSR标记多态性改变的研究中文摘要目的:在开展实验红鲫标准化及其应用研究的基础上，进一步研究

3、实验红鲫在氯化镉胁迫下AFLP标记和SSR标记多态性的改变，探讨AFLP标记和SSR标记对镉污染的预警作用。方法:以实验红鲫为实验对象，经不同浓度、不同时间的氯化镉染毒处理后，分别进行AFLP、SSR标记多态性分析。根据前期实验得出的氯化镉对实验红鲫的96hLC50，设置96hLC50的1/16、1/8、1/4、1/2等4个不同浓度的氯化镉染毒组和1个对照组，对实验红鲫染毒8d。从染毒当天起，每隔2天活体采集实验红鲫尾静脉血液，提取血细胞DNA，以作AFLP、SSR标记多态性分析备用。先以EcoRI、TrulI和T4DNA，DNA经酶切

4、-连接，然后以8对引物进行选择性PCR扩增；再采用Quantityone软件，分析AFLP标记PCR扩增凝胶图谱；用PopGene软件统计各组实验红鲫AFLP标记PCR扩增条带数(N)、扩增片段大小、多态性位点数（Np）、基因多态性含量（PIC）；最后用Origin8.0软件分析多态性信息含量。从鲫鱼SSR引物中选取其中6对SSR引物对实验红鲫DNA进行PCR扩增，扩增产物用Quantityone软件和PopGene软件进行图谱分析，统计出每个SSR标记的等位基因数目（Na）、有效等位基因数目（Ne）、基因杂合度（H）、多态性信息含量（

5、PIC）；最后用Origin8.0软件分析基因杂合度和多态性信息含量。结果:1.AFLP标记多态性：8对不同引物的PCR扩增条带数从18到30不等，多态性条带数从14到24不等。在正常组实验红鲫中，由8对引物扩增的条带为65条，多态性条带总数目为30个；在氯化镉染毒组实验红鲫中，由8对引物扩增的条带数目为182个，多态性条带为147条。其中，在1/8LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫中，多态位点总数增加到36个，而在1/8LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第6d的实验红鲫中，多态位点数目达到41个。以引物E-ACC/T-CTC扩

6、增的条带数，正常组的实验红鲫为10条，在8对引物中为最多，2万方数据1/8LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第4d的实验红鲫为12条。以引物E-ACA/T-CTT和引物E-AAC/T-CAG扩增的条带数，正常组的实验红鲫为7条，多态性条带为3条，在正常组8对引物中最低。以引物E-ACA/T-CTC1/2LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第8d的扩增条带为2条，多态性条带为1条，在8对引物中为最低。对8对引物的PCR扩增产物进行分析，在正常组实验红鲫中，AFLP标记多态性信息含量平均值为46.15%，在氯化镉染毒组实验红鲫中，AFLP标记多态性信

7、息含量达到80.77%。其中，以引物E-AAC/T-CAT扩增的多态性含量，正常组中的实验红鲫为37.50%，在8对引物中为最低，在氯化镉染毒组中的实验红鲫为75.00%；以引物E-ACT/T-CTC扩增的多态性含量，正常组中的实验红鲫为62.50%，在8对引物中为最高；以引物E-ACA/T-CTC扩增的多态性含量，在氯化镉染毒组中的实验红鲫为85.71%，在8对引物中为最高。2.SSR标记多态性：6对SSR引物的PCR扩增的多态位点数目，正常组中的实验红鲫为0，氯化镉染毒组中的实验红鲫，随着氯化镉浓度的升高和染毒时间的延长，多态位点数

8、目也随之增加。其中，在1/16LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫，多态位点数目最少，为8个；在1/2LC50浓度的氯化镉染毒组染毒第2d的实验红鲫，多态位点数目增加到12个；而在1/4LC50浓