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1、美洲南瓜裸仁基因的AFLP和SCAR分子标记分析第42卷第7期2011年7月东北农业大学JournalofNortheastAgriculturalUniversity42(7):67-71July2011美洲南瓜裸仁基因的AFLP和SCAR分子标记分析李智媛,屈淑平,崔崇士(东北农业大学园艺学院,哈尔滨150o30)摘要:以美洲南瓜有壳品系"金辉二号一2"和无壳品系"0516—2"进行杂交,获得193个F2单株作为作图群体,利用AFIP分子标记技术和集群分析法(BsA)对与美洲南瓜裸仁基因连锁的分子标记进行研究.结果表
2、明,找到了与裸仁基因n连锁的4个AFLP标记:E19M60一C,E22M48一B,E13M60一A和E25M51一D,连锁遗传距离分别为8.9,14.1,17.5和l8.8cM.同时将E19M60一C转化为操作简便,表现稳定的SCAR标记,用于美洲南瓜的分子标记辅助育种.关键词:美洲南瓜;裸仁基因n;AFLP;SCAR中图分类号:$642.1;Q75文献标志码:A文章编号:1005—9369(2011)07—0067—05DevelopmentofAFLPandSCARmarkerslinkedtohull-lessng
3、eneinpumpkin(CucurbitapepoL.)ILlZhiyuan,QUShuping,CUIChongshi(CollegeofHorticulture,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030.China)Abstract:ApopulationofpumpkinF2generationincluding193individualplantswasderivedfr0mthecrossingbetweenhulllineJinhui2—2andhullles
4、sline0516?2inthisstudy.AFLPandbulkedsegragantanalyses(BSA)wereusedtoidentifymolecularmarkerslinkedtohull-lesstraitsinF2population.FourAFLPmarkersweredeveloped.ThegeneticdistanceamongfourAFLPmarkersE19M60-C,E22M48-B,E13M60-A,E25M51-Dandhull—lessseedgenewere8.9,14.
5、1,17.5and18.8cM,respectively.AndE19M60一CwasalsosuccessfullyconvertedintoaSCARmarker.Keywords:Cucurbitapepo;hull-lessngene;AFLP;SCAR南瓜属作物的种子属于双子叶无胚乳型种子,由种皮和胚组成.根据南瓜种子种皮的结构特点,将南瓜分为有壳南瓜种子和无壳南瓜种子,常见的南瓜为有壳南瓜,而无壳南瓜又称裸仁南瓜,它是在有壳南瓜中发现的突变体,种壳在发育过程中退化为薄薄的一层膜,目前在美洲南瓜和中国南瓜中均存
6、在无壳突变种㈣.控制美洲南瓜裸仁性状的基因为隐性基因凡,控制中国南瓜裸仁性状的基因为隐性基因n一2嘲.无壳南瓜种皮退化,种仁裸露,可以直接加工食品和食用,免去了脱皮的加工工序和加工损失,降低加工成本,出仁率高,营养丰富,是一种优异的南瓜种质资源同.鉴定和克南瓜裸仁基因对于南瓜育种具有重要理论和实践意义.本试验中利用AFLP技术筛选与裸仁基因凡紧密连锁的分子标记,为建立裸仁性状的分子标记辅助育种,开展裸仁南瓜育种提供技术基础.1材料与方法1.1植物材料及基因组DNA的准备以有壳品系"金辉二号一2"为母本,无壳品系"0516
7、—2"为父本配制正反交组合,F.与无壳亲本进行回交,F代自交获得F2代种子.2008年春季,在收稿13期:2Oll—Ol一11基金项目:东北农业大学科技创新团队项目作者简介:李智嫒(1982一),女,硕士研究生,研究方向为分子遗传育种.E-mall:zhiyuannaiC/~ahoo.e0m-cn通讯作者:屈淑平,副教授,研究方向为蔬菜分子遗传育种.E-mail:qushuping@8ohu.c0m68.东北农业大学第42卷东北农业大学试验实习基地种植亲本,F.,Fz及回交世代.对F代和回交世代进行性状分离调查,统计分离
8、比率.父母本及各世代材料幼叶在液氮中冷冻,一80℃保存,DNA的提取采用CTAB微量法提取用.1-2AFLP反应程序1.2.1酶切一连接采用EcoRI和MseI对基因组DNA进行双酶切,酶切一连接一步进行,预扩引物为E00和MOO组合,选择性扩增采用E+2,~I+3引物组合.在总体积25的酶切一连接体系中EcoRI(
