靶向wntβ-catenin通路的溶瘤腺病毒携带抑癌基因tslc1抑制肿瘤细胞增殖的研究

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1、靶向Wnt/B-catenin通路的溶瘤腺病毒携带抑癌基因TSLC1抑制肿瘤细胞增殖的研究金槿赵雨佳章健王彬蓉王毅刚浙江理工大学生命科学学院摘要：溶瘤病毒(oncolyticviruses)可选择性地感染肿瘤细胞并在其中复制，使宿主细胞裂解并在体内产牛强烈的免疫应答反应，从而抑制或者杀死肿瘤细胞。因其特有的溶瘤性和靶向性，溶瘤病毒成为肿瘤基因治疗的热门领域之一。基于Wnt信号的肿瘤特异性，本研究使用Wnt信号启动子TCF/LEF结合位点序列，调控腺病毒早期基因E1A,并删除E1A基因序列上能与Rb蛋口结合的24bp片段。将抑癌基因TSLC1插入腺病毒的E3区

2、，形成重组腺病毒Ad.wnt-ElA(A24)-TSLClo通过双荧光素酶报告系统、Westernblot实验、MTT法、结晶紫染色法、Hoechst染色实验分别检测Wnt信号活性、肿瘤细胞的存活率和凋亡的变化情况。结果发现，肿瘤细胞较正常肝细胞具有较高的Wnt通路活性和病毒敏感性，其中重组病毒处理HepG2后杀伤效果显著，并可通过Caspase通路诱导细胞凋亡,为肝癌的临床治疗提供参考。关键词：基因治疗;Wnt/B-catenin通路；溶瘤腺病毒;细胞凋亡;作者简介：王毅刚Tel:0571-86843187,E-mail:wangyiga.ng43@l63

3、.com收稿日期：2017-07-21基金：国家自然科学基金(批准号：81272687)TheStudyonInhibitionofTumorCellProliferationbyOncolyticAdenovirusesTargetingWnt/B-cateninParthwayandDeliveringTumorSuppressorTSLC1JinJinZhaoYujiaZhangJianWangBinrongWangYigangCollegeofLifeSciences,ZhejiangSci-TechUniversity;Abstract：Oncol

4、yticvirusesareabletoseiectivelyinfectandreplicateintumorcells,whichfurtherlysestumorcellsandproducesimmunologicalresponsetoinhibitorkilltumorcells.Oncolyticvirusesbecomeoneofthemostpromisingfieldsfortumorgenetherapyduetotheirspecialoncolysisandtumortargetingability.Basedonthetumors

5、pecificityofWntsignalpathway,ourstudyusedthenovelconstructedoncolyticadenovirusAd.wntElA(A24)-TSLC1withamutantElAexpressioncassettedrivenbyTCF/LEFbindingsitepromoteranddeliveringatumorsuppressorgeneTSLC1.TheWntsignallingactivity,survivalrateandapoptosisoftumorcellsaredetectedbyDual

6、-Luciferasereporter,Westernblot,MTT,crystalvioletandHoechststainingassay,respectively.TheresultsshowthattumorcellshavehigherWntsignalactivityandstrongersensitivitytooncolyticvirusescomparingwithnormalcells.Ad.wnt-ElA(A24)-TSLC1caneffectivelykillHepG2cellsandinduceapoptosisthroughCa

7、spasepathwayactivation,whichprovidesthereferencefortheclinicaltreatmentofhepatocellularcareinoma.Keyword：genetherapy;Wnt/B-cateninpathway;oncolyticadenoviruses;cellapoptosis;Received：2017-07-21肿瘤的基因治疗(genetherapy)是指通过基因工程手段将外源基因导入靶细胞来纠正缺陷或突变基因，以达到抑制或杀死肿瘤细胞的口的UL溶瘤病毒(oncolyticviruses

8、)因其可选择性地在恶性肿瘤中复制从而使宿主细胞裂解并