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1、外翻肠囊吸收成分和药效相关探究吴茱萸汤治疗偏头痛药效物质［摘要］吴茱萸汤是治疗虚寒性偏头痛的经典方剂，其与偏头痛治疗相关的有效成分尚不明确。该实验米用大鼠外翻肠囊模型获取10种吴茱萸汤的吸收样品，以HPLC-DAD对吴茱萸汤及外翻肠囊吸收样品中9种成分进行定量、半定量，得到各成分在汤中的含量及在肠囊中的累积吸收量。同时建立利血平化小鼠偏头痛动物模型，在给予吴茱萸汤治疗后测定脑组织内5-務色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT),去甲肾上腺素(noradrenaline,NE),多巴胺(dopamine,DA)及脑组织与血清内一氧化氮(nitrico
2、xide,NO)及其合成酶(nitricoxidesynthase,NOS)的含量与活力。最后运用偏最小二乘回归法(partialleastsquaresregression,PLSR)对各成分总吸收量与药效指标进行相关分析，发现了外翻肠囊吸收成分中影响药效的主要成分是柠檬黄素-3-0-B_D~葡萄糖昔(limocitrin-3-O-3-D-glucoside,Les),人参皂昔Rgl(ginsenosideRgl,Rgl),人参皂昔Rbl(ginsenosideRbl,Rbl)、吴茱萸苦素(rutaevine,Rv)、柠檬苦素(limonin,Li)、吴茱萸碱(
3、evodiamine,Ev)及吴茱萸次碱(rutaecarpine,Ru),其中Rgl,Rv,Ev及Ru对多数药效指标具有正向改善作用，可能是影响吴茱萸汤治疗偏头痛作用的主要成分。［关键词］吴茱萸汤；偏头痛；外翻肠囊吸收谱效相关;偏最小二乘回归；药效物质［收稿日期］2013-08-17［基金项目］北京市教育委员会科技计划面上项目(SQKM201210025011)；首都中医药研究专项重点课题项目(13ZY02)［通信作者］*龚慕辛，博士，博士生导师，从事中药复方物质基础研究，Tel:(010)83911632,E-mail:gongmuxin@126.com［作者
4、简介］潘学强，硕士研究生，E-ma订：pxq_xq@163.com吴茱萸汤出自《伤寒论》，现代临床上主要用于治疗多种头痛［1］。全方由吴茱萸、生姜、人参及大枣4味中药组成。曾有学者采用化学分析与药理相结合的方法对其药效物质进行研究［2-3］,但由于缺乏成分分析与治疗偏头痛相关药效指标的关联，使其有效成分尚不明确，影响了质量控制与治疗作用的优化。本实验将10种吴茱萸汤中的9种成分在外翻肠囊的累积吸收量与偏头痛药效指标相关联，采用PLSR进行分析，并与吴茱萸汤谱效相关结果进行对比，以发现吴茱萸汤吸收成分中影响药效的主要成分，为其治疗偏头痛的药效物质研究提供参考。1材料
5、ICRQiALC-M组织-器官恒温水浴系统（上海奥尔科特生物技术有限公司）；Agilent1100系列高效液相色谱系统，Chemstation色谱工作站，含四元泵、自动进样器、DAD检测器（Agilent公司）；ESA高效液相色谱系统，Coularry工作站，含二元泵，自动进样器，电化学检测器（ESA公司）；MG-2200氮吹仪（EYELA公司）；SilentCrusherM匀浆仪（Heidolph公司）；3K15低温高速离心机（Sigma公司）；UV-2450紫外可见分光光度计（SHIMADZU公司）；SpectraMaxPlus384酶联免疫检测仪（Molec
6、ularDevices公司）；DV215CD电子分析天平（Sartorius公司）；KQ-250超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。利血平注射液（广东邦民制药厂有限公司，批号100509）；琥珀酸舒马普坦片（天津华津制药有限公司，批号2F69151）；注射用青霉素钠（中诺药业有限公司，批号016110691）；N0测定试剂盒（批号20130206）,N0S测定试剂盒（批号20130228）,考马斯亮蓝试剂盒（批号20130216）,均购自南京建成生物工程研究所；吴茱萸碱（批号110801-200908,纯度99.7%）,吴茱萸次碱（批号110801-20120
7、7,纯度99.4%）,柠檬苦素（批号110800-201205,纯度88.5%）,人参皂昔Rgl（批号110703-201128,纯度93.4%）,人参皂昔Re（批号110754-201123,纯度89.1%）,人参皂昔Rbl（批号110704-201223,纯度95.9%）,6-姜辣素（批号111833-201102,纯度98.6%）对照品购自中国食品药品检定研究院；柠檬黄素-3-0-0-D-葡萄糖昔（自制,纯度±95%）；5-HT（批号N-5785-250MG）,DA（批号H8502-5G）,NE（批号H7752-250MG）,3,4-二强基节胺（3,4-di
8、hydro
