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1、基于HPLC指纹图谱不同产地升麻质量评价探究［摘要］建立不同产地升麻药材的指纹图谱。使用Kromasil色谱柱(4.6mmX250mm,5um),流动相乙月青-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱，柱温35°C,流速1.0mL•min-1,检测波长254nmo提取12个色谱峰作为指纹图谱共有峰，采用相似度评价、聚类分析、主成分分析等方法，对所收集的21批样品进行系统比较与归类。结果确定了12个共有峰,将不同产地的样品分为3类。该法重复性好，简便可靠，可以为不同产地升麻的质量控制和评价提供依据。［关键词］升麻；指纹图谱升麻为毛滾科植物大三叶升麻Cimicifugaheracleif
2、oliaKom.、兴安升麻C.dahurica(Turcz.)Maxim.或升麻C.foetidaL.的干燥根茎［1］,主产于四川、青海、陕西、云南、东北等地，是我国传统中药材。升麻始载于《神农本草经》，列为上品，其味辛、微甘，微寒，归肺、脾、胃、大肠经，具有清热解毒、发表透疹、升举阳气的功能，用于风热头痛、齿痛、口疮等。升麻在全国多个地区均有种植，但不同产地升麻的质量差异有待进一步研究。2010年版《中国药典》一部中，以异阿魏酸的含量作为其质量控制指标，已有研究报道将3种酚酸类成分作为升麻的质量控制指标[2],对不同产地升麻进行质量评价，但数据处理较为简单。为了进一步
3、研究并揭示不同产地升麻的质量差异，本试验采用指纹图谱结合多种化学计量学的数据处理方法进行分析，进而评价不同产地升麻的质量。1材料日本岛津公司ShimadzuLC-20AB高效液相色谱系统，包括在线脱气机.ProminenceSIL-20A自动进样器、SPD-M20A二极管阵列检测器、CTO-20A柱温箱；BS2242S电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）;RE-52旋转蒸发仪（瑞士步琪）。异阿魏酸（纯度99%,批号ZL1203089）.阿魏酸（纯度99%,批号ZL1203158）.咖啡酸对照品（纯度99%,批号ZL1202169）均购自南京泽朗医药科技有限公司；
4、甲酸（分析纯，南京化学试剂有限公司）；乙睛（色谱纯，美国天地公司）；水（杭州娃哈哈公司）。升麻药材共21批，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为正品，密封保存于阴凉干燥处。其来源见表1。2方法与结果2.1色谱条件KromasilC18色谱柱（4.6niniX250mni，5um）；流动相乙睛（A）-0.1%甲酸溶液（B）,梯度洗脱，0〜25min,5%〜13%A,25〜60min,13%〜18%A,60〜88min,18%〜28%A,88〜110min,28%〜50%A,110〜115min,50%〜60%A,115〜120min,60%〜5%A,流速1.0mL・min-1
5、；测定波长254nm；柱温35°C；进样量10uLo2.2混合对照溶液的制备精密称取异阿魏酸、阿魏酸及咖啡酸对照品适量，置棕色量瓶中，加甲醇制得每毫升分别含异阿魏酸0.443mg,阿魏酸0.451mg,咖啡酸0.439mg的混合溶液，摇匀，作为对照品储备液。2.3供试品溶液制备取升麻药材粉末约lg,精密称定，置150mL圆底烧瓶中，加入75%乙醇20mL,回流提取3次，每次1h,滤过，滤液减压蒸干，用80%甲醇溶解并定容到10mL量瓶中，摇匀，0.45pm微孔滤膜滤过，即得。2.4指纹图谱方法学考察2.4.1精密度试验取6号升麻供试品溶液，连续进样6针，每次10uL,考
6、察色谱峰保留时间的一致性，结果表明,共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.05%〜2.3%,1.24%〜2.62%,说明各主要色谱峰保留时间与峰面积基本一致，符合指纹图谱的要求。2.4.2稳定性试验精密吸取6号升麻供试品溶液10UL,分别在0,2,4,8,16,24h进行检测，结果表明，共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.05%〜2.5%,0.93%〜1.22%,表明供试品溶液在24h内稳定性良好。2.4.3重复性试验取同批号样品6份，按2.3项下方法制备样品，按照2.1项下色谱条件进样测定，结果表明，共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为1
7、.24%〜2.62%,1.62%〜2.37%,符合指纹图谱的要求。2.5样品测定按2.3项下方法制备21批供试品溶液，分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10uL,注入到高效液相色谱仪测定，记录色谱图，共获得12个共有峰，通过对照品指认，其中3个共有峰分别为咖啡酸（1号峰）、异阿魏酸（2号峰）、阿魏酸（3号峰），结果见图1。2.6指纹图谱的建立及分析2.6.1参比峰的选择在各批次样品图谱中，2号色谱峰（异阿魏酸）分离度较好，为样品所有样品共有，故选择2号峰为参照峰。2.6.2指纹图谱的建立及相似度评价将21批升麻样品色谱图导入《中药色
