4―羟基苯乙酸对酪氨酸酶作用机理探究

《4―羟基苯乙酸对酪氨酸酶作用机理探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、4一轻基苯乙酸对酪氨酸酶作用机理探究摘要：本实验研究了4-軽基苯乙酸对酪氨酸酶的作用机理。实验结果表明：在低浓度条件下，4-轻基苯乙酸对酪氨酸酶具有激活抑制作用；在高浓度条件下，4-轻基苯乙酸对酪氨酸酶具有抑制作用。关键词：酪氨酸酶4-轻基苯乙酸激活作用中图分类号：Q356.1文献标识码：A文章编号：1674-098X(2013)01(a)-00-01酪氨酸酶(Tyrosinase),又称多酚氧化酶，是一种含铜金属酶，广泛存在于细菌、真菌、裸子植物、被子植物、哺乳动物等生物中，并存在于生物界系统发育阶段的各个水平。一般认为，羽毛，毛发，眼睛，昆虫表皮，种子等呈现出黑色、褐色、浅黄色等色素

2、，都是酪氨酸酶作用的结果。酪氨酸酶的产物黑色素具有抗紫外线、清除自由基、抗病毒等重要功能。最新研究结果表明，可利用黑色素制备相应的抗体来治疗与酪氨酸酶表达相关的疾病。因此，国内外很多学者都致力于寻找具有特异的、高效的酪氨酸酶作用物，研究其抑制或激活的作用机理和动力学。该文以4-拓基苯乙酸作为效应物，研究其对酪氨酸酶催化反应的影响及作用动力学，得到有关动力学参数，为酪氨酸酶抑制剂和激活剂的分子设计的实际应用提供理论依据。1实验方法1.1材料及仪器蘑菇酪氨酸酶(Mushroomtyrosinase)购于Sigma公司，总活力为50KUoL-3,4-二務基苯丙氨酸(L-D0PA)购于上海斯高勒

3、生物技术有限公司。对强基苯乙酸、磷酸氢二钠(Na2HP04)和磷酸二氢钠(NaH2P04)等试剂均为国产分析纯。仪器为上海UNIC0公司UV-2102PC型紫外可见分光光度计。1.2酪氨酸酶酶活测定以1.0mML-D0PA为底物。先将0.6mL5mM的L-酪氨酸(溶于pH6.8的Na2HP04-NaH2P04缓冲液)溶液置于石英比色皿中，加入2.28mLpH6.8的Na2HP04-NaH2P04缓冲液，置于30°C恒温水浴中恒温10min,加入90uL含不同浓度的4-释基苯乙酸溶液和0.8mg/mL酪氨酸酶水溶液，测定0D475。此测活体系中，酶的终质量浓度为1.0ug/mLo2结果与讨

4、论2.14-瓮基苯乙酸对酪氨酸酶的影响如图1所示，固定酪氨酸酶催化反应体系中的终质量浓度为0.55Ug/mL,底物L-D0PA的浓度为1.0mmol/L0结果表明，在4-務基苯乙酸浓度在10.0mmol/L以内，对酪氨酸酶催化氧化L-D0PA起激活作用，并且激活作用随4-轻基苯乙酸浓度的激活程度是先增加后下降，在2.0mmol/L浓度左右，酶催化活力变为原来的2.4倍。当酶催化反应体系中4-軽基苯乙酸的浓度超过10mmol/L,4-軽基苯乙酸对酪氨酸酶起抑制作用，当4-務基苯乙酸浓度为15.0mmol/L时,酶催化活力变为原来的20%o2.24-務基苯乙酸对酪氨酸酶作用机理分析黑色素的合

5、成途径一般被分为两个阶段：远端步骤和近端步骤。近端步骤包括单酚和/或邻-二酚的酶氧化，由含铜酪氨酸酶催化形成邻酿；远端步骤包括化学反应和酶反应，最终合成黑色素。（见图2）在双酚酶催化循环中，还原态酶（Emet）与双酚（D）非共价结合，双酚上的释基被亲核试剂进攻释放出2个H+,生成的复合物Emet-D分解释放出醍（Q）、水和脱氧态酶（Edeoxy）oEdeoxy结合氧气生成氧化态酶（Eoxy）,Eoxy可结合单酚也可以结合双酚，结合双酚后继续进行双酚循环，双酚与氧化态酶非共价结合，双酚上的释基被亲核攻击，释放出2个H+,同时双酚与铜离子形成分子轨道共面，研究已表明，分子轨道共面对于氧化还原

6、反应的发生是必需的，生成复合物Emet-D并分解释放出酪、水和还原态酶，完成循环双酚在此循环中不断被氧化成为醍，如图所示。3结语通过酶动力学手段，筛选酪氨酸酶高效的激活剂4-務基苯乙酸，并总结出相关的构效关系，为进_步设计和改造得