5-脂氧合酶在异氟醚预处理诱导脑保护机制中的作用分析

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1、分类号R614第四军医大学UDC616密级公开TheFourthMilitaryMedicalUniversity硕士学位论文5-脂氧合酶在异氟醚预处理诱导脑保护机制中的作用研究吕海港培养类别全日制学位类型专业学位一级学科(专业类)临床医学二级学科(专业)麻醉学研究方向吸入麻醉药的脑保护作用指导教师孙绪德教授（主任医师）培养单位唐都医院麻醉科二O一三年五月第四军医大学硕士学位论文缩略词英文全称中文全称AAarachidonicacid花生四烯酸OGDoxygen-glucosedeprivation氧糖剥夺PBSphophate-buffersalin

2、e磷酸盐缓冲液DEPCdiethypyrocarbonate焦炭酸二乙酯PVDFpolyvinylidenefluoride聚偏二氟乙烯膜-2-第四军医大学硕士学位论文5-脂氧合酶在异氟醚预处理诱导脑保护机制中的作用研究硕士研究生：吕海港导师：孙绪德教授辅导教师：高昌俊副教授第四军医大学唐都医院麻醉科，西安710038资助基金项目：国家自然科学基金（30972833）中文摘要关键词：脑缺血再灌注损伤；异氟醚；5-脂氧合酶；髓样细胞分化因子88；核转录因子-κB缺血性脑血管病（IschemicCerebrovascularDisease，ICVD）已经成

3、为威胁人类生命健康的常见病和多发病，是一种以脑部血液循环障碍为主要特征的中枢神经系统疾病。脑缺血再灌注过程中炎症反应是造成该类型疾病病理损伤的主要机制，因此，脑缺血再灌注过程中的炎症反应成为研究此类疾病的重要突破点。5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LOX）是缺血再灌注损伤后脑内生成的重要炎症因子之一，其在机体的炎症反应中起到关键的作用，同时有大量的实验证实5-LOX参与了脑缺血后的病理生理过程。另有研究表明巨噬细胞内5-LOX是髓样细胞分化因子88(MyD88)依赖性NF-κB生成的关键分子，其抑制剂同样可以起到脑保护的作用。另外Tol

4、l样受体（TLRs）介导的炎症反应参与了脑缺血再灌注损伤中的炎症反应机制。脑缺血再灌注后Toll样受体4(TLR4)被激活，其通过依赖MyD88信号途径诱导了NF-κB等活化，从而介导了炎症级联反应。其中MyD88是各种TLRs信号的汇集点，成为信号通路中的关键分子。-3-第四军医大学硕士学位论文本课题组前期研究表明，异氟醚预处理可以通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达以减轻炎症反应，进而使大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤减轻。那么，在中枢神经系统中，5-LOX对MyD88依赖性NF-κB生成中起到怎样的作用，此外异氟醚预处理是否也可通过抑制5-LOX起

5、到脑保护的作用？本实验采用大鼠的大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，通过对5-LOX、Myd88及NF-κB等关键分子的定性定量分析，探讨脑内5-LOX对MyD88依赖性NF-κB生成的作用及其在异氟醚预处理诱导脑保护机制中发挥的作用。实验一脑缺血再灌注后5-LOX对MyD88依赖性NF-κB生成的影响目的：探讨中枢神经系统内5-LOX对NF-κB生成的影响方法：雄性成年SD大鼠30只，体重250~280g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为3组（n=10）：假手术组（S组）仅分离血管不进行线栓栓塞；局灶性脑缺血再灌注组（I/R组）采用线栓法制备MCAO模型

6、，120min后拔出线栓，恢复再灌注；抑制剂组（B组）经颈部血管给予2mg/kg的5-LOX抑制剂BW-B70C，30min后制备MCAO模型，120min后拔出线栓，恢复再灌注。再灌注24小时处死动物取脑分别采用Westernblot法和RT-PCR法测定测定5-LOX、MyD88及NF-κB的蛋白及mRNA的表达水平。结果：与S组比较I/R组、B组5-LOX、MyD88及NF-κB的蛋白及mRNA的表达均显著增高（P<0.05）；与I/R组比较，B组5-LOX、MyD88及NF-κB的蛋白及mRNA的表达均显著降低（P<0.05）。结论：脑缺血再灌

7、注后5-LOX参与了MyD88依赖性NF-κB的生成。实验二探讨5-LOX在异氟醚预处理诱导脑保护机制中的作用目的：探讨5-LOX在异氟醚预处理大鼠MCAO模型诱导脑保护机制中的作用。方法：雄性SD大鼠39只，体重250~280g，采用随机数字表法，将大鼠随机分为3组（n=13）：假手术组（S组）仅分离血管不进行线栓栓塞；局灶性脑缺血再灌注组-4-第四军医大学硕士学位论文（I/R组）采用线栓法制备MCAO模型，120min后拔出线栓，恢复再灌注；异氟醚预处理组（I组）2%异氟醚预处理2h，24h后制备MCAO模型120min后拔出线栓，恢复再灌注。再灌

8、注24h后进行神经功能缺陷评分，随后处死，冰上取脑在脑槽中切片行TTC染色测量脑梗死体积，并采