人类精子形态学-综述.doc

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1、精子形态学检查的研究进展柴宇静1综述周运恒基金项目：上海市长宁区卫生局临床课题（20104Y18001）通讯作者：周运恒，E-mail:hongniwan@gmail.com。审校1.上海市杨浦区精神卫生中心检验科（上海200090）；2.武警上海市总队医院检验科据报道，世界范围内约有15%~20%的育龄夫妇不能生育，且近半个世纪以来，随着全球污染问题的日益严重，社会竞争压力的日趋增加，生活步伐节奏的不断加快，男性生殖健康正受到严重威胁，男性精子数量几乎减少了一半，并且，还以每年2.1%的速度在减少。同时，畸形、劣质精子比例逐渐增多，精子活力、穿透力、致孕率在不断下降

2、，致使男性不育的比例正在逐年上升。精液分析在诊断男性不育及辅助生殖方面起到越来越重要的作用，精液分析主要包括了精子形态、精子活力和精子密度等。随着染色技术的发展和畸形精子分类体系的形成，精子形态学检查对不孕不育症诊断、生育能力预测以及基础或者公共健康研究有重要意义，比精子密度、精液质量和运动性更能在受孕中起到预测作用[1]。本文主要从精子形态学检查的发展历史、方法学比较、分类标准和临床意义等方面进行综述。一、发展历史将精子形态作为评估男性生育潜能的指标开始于20世纪初，当时已公认在一份精液样本中可同时出现正常的和病态的精子。1916年，Cary第一个把精子畸形与男性生

3、育力联系起来[2]。1925年Williams和Salvage[3]及1931年Moench和Holt[4]均指出精子形态也是决定生育能力的因素。但以何种形式评估正常或异常精子多年来一直存有争议。从1980年第1版世界卫生组织（WHO）手册到2010年出版的第5版，精子形态学的评估标准主要经历了2种演变，即自由的方法和严格的方法（Tygerberg）。在第1版中，精细胞的分类是以MacLeod提出的方法为基础的，并没有对形态正常精子进行明确的说明，因此使用了自由的方法，从第3版开始推荐所谓的“Tygerberg严格精子形态学标准”。在手册连续出版过程中正常形态精子的参

4、考范围也从第1版的≥60%，下降到第5版的≥4%[5]。二、检测方法精子形态的检测可以通过手工分析和计算机辅助精液分析系统（Computer–AssistedSemenAnalysers,CASA）来完成。CASA相对于手工检测精子形态的主观性，其准确性更高，可检测出肉眼无法发现的非正常形态精子[6]。但目前，CASA在短时间内还不能完全替代手工检测。因为CASA的高度敏感性，其在检测过程中可能将细胞碎片、染料颗粒或其他与精子头大小相似的细胞误读为精子，同时还存在着其他影响因素，比如涂片制备的染色差异、涂片精子密度不均一、涂片背景对比，另外检测人员需对计算机系统分析的

5、精子形态进行校正，其主观性也会影响结果的准确性[7]。WHO在1999年出版的精液分析手册中指出手工分析包括涂片、干燥、固定、染色及精子计数等步骤。手工分析要求简单、操作简便，但由于各个实验室检测方法的不一致、人员操作的不规范、染色方法的不统一等等，导致了检测结果存在着较大差异，主要表现在染色及精子计数方面。因此CASA和手工方法都有其优点和局限性，我们需取长补短，更精确地做出检验分析报告，更好的为临床服务。目前，国内外报道的常用于精子形态学分析的染色方法主要有6种：改良巴氏染色法、苏木精-伊红（HE）染色法、瑞氏染色法、瑞-吉氏染色法、Diff-Quick染色法和S

6、horr染色法等，这6种不同的染色方法会导致不同的精子形态评估结果。究竟哪一种方法作为分析精子形态学最为合适，且最能准确地反映真实的精子形态学检测结果，目前相关的文献报道较少[8]。鉴于此，陆金春等[9]对上述6种精子染色方法对精子形态学的影响进行了比较分析。结果显示：6种染色方法对精子头大小的影响不同，根据精子头的长轴、短轴、面积和周长作为比较因素，6种染色方法由高到低的排列顺序依次为：瑞-吉氏染色法、瑞氏染色法、Diff-Quick染色法、HE染色法、Shorr染色法和改良巴氏染色法。不同染色法对精子头大小产生显著影响的原因尚不清楚，可能与不同化学物质的特性和不同

7、染色液的渗透压等有关。6种精子染色方法中Diff-Quick和Shorr染色法可以很清楚地区分顶体和核。基于不同染色方法对精子头大小的影响、染色效果以及操作的简易与否，Diff-Quick和Shorr染色法值得推荐。另外，王成等[10]研究表明，Diff-Quick染色法简单快捷，而且染色后有利于精子畸形和顶体完整性的观察。而改良巴氏染色法可以长期保存标本，对精子细胞核、核仁及细胞质分别染色，可以使精子内各结构对比明显，而使精子形态检测更加容易。而《世界卫生组织人类精液分析实验室技术手册》第5版中，主要推荐使用巴氏染色、Shorr或者Diff-Qui