道地药材建青黛组织培养技术研究

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1、道地药材建青黛组织培养技术研究　　摘要以建青黛顶芽为外植体，MS为基本培养基，研究不同激素组合的培养基对顶芽诱导、增殖及生根的影响。试验结果表明：最佳顶芽诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，最佳增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L，最佳生根培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L+IBA0.05mg/L。　　关键词道地药材；建青黛；组织培养；顶芽　　中图分类号S567.9文献标识码A文章编号1007-5739（2016）09-0070-014　　青黛味淡、性寒，具清热解毒、凉血止血、定惊之功效，

2、临床常用于时病热毒，发癍吐血、胸痛咯血。近年来，研究发现青黛的主要成分之一的靛玉红对白血病有一定的疗效，从而引起了国内外的极大关注[1]。青黛作为一种传统中药材，主产于福建、河南、河北、江苏和四川等地，其中福建产的品质最佳，称之为建青黛，为公认的名优道地药材。建青黛含靛蓝最高可达3.5%，含靛玉红最高可达0.35%，高于药典的要求（含靛蓝不低于2.0%，含靛玉红不低于0.13%）。目前福建唯仙游县书峰乡有生产，传统的繁殖方法为扦插繁殖，而常年无性繁殖会导致种源退化。植物组织培养具有繁殖系数大、脱病毒复壮等优点[2-5]，然而组织培养方法应用在青黛上却未见报道。本研究以

3、青黛顶芽为外植体，建立青黛种苗工厂化生产的完整体系，为大量推广优质福建道地青黛种苗及建青黛种质资源保护奠定基础。　　1材料与方法　　1.1供试材料　　供试材料为福建省道地青黛，摘取幼嫩的顶芽和侧芽为外植体。　　1.2培养条件　　本试验采用的诱导、增殖培养基本培养基为MS培养基，生根培养基本培养基为1/2MS（大量元素减半）培养基，附加不同浓度的6-BA、NAA、IBA（单位：mg/L，下同）。基本培养基中，蔗糖为3%，琼脂为0.7%，pH值为5.8～6.0。培养条件为（25±2）℃，每天光照12h，光照强度为2000～2500lx。　　1.3试验方法　　选择健康的无病

4、斑的顶芽，用流水冲洗2h，用洗衣粉浸泡10min，用刷子轻刷，然后用自来水冲洗干净。在超净工作台上用75%的酒精浸泡30s，再用0.1%的升汞消毒8min，无菌水冲洗4次后，接种在诱导培养基上。当青黛组培苗长至高约2.5cm时切下接入8种生根培养基中，每瓶5株，每个处理10瓶。　　2结果与分析　　2.1不同激素组合对建青黛顶芽初代诱导的影响　　建青黛顶芽接种15d后，基部切口处开始膨大，随后慢慢出现许多绿色的小芽点，30d左右开始分化出不定芽。　　从表1可以看出，当NAA浓度不变时，随着6-BA浓度的增加，诱导率呈增加趋势；但当6-BA浓度为1.504mg/L时，诱导

5、出的苗有轻微的玻璃化；当6-BA浓度为2.00mg/L时，诱导出的苗会玻璃化。当6-BA浓度都为1.00mg/L时，随着NAA浓度（0.05～0.50mg/L）的升高，诱导率呈先上升后下降的趋势。在NAA浓度为0.10mg/L时，外植体的诱导率达到最高即93.33%，且苗长势正常；而NAA浓度超过0.10mg/L时，随着NAA浓度的增加，诱导率却降低。　　2.2不同激素组合对建青黛增殖的影响　　从表2可以看出，在6-BA浓度为0.8mg/L或1.0mg/L时，培养基中生长的苗叶色正常，未见玻璃化现象，而当培养基中6-BA浓度为1.2mg/L时，IBA3个不同浓度的培养

6、基中生长的苗都表现为叶色较淡、有轻微玻璃化现象。当6-BA浓度为0.8、1.0或1.2mg/L时，IBA浓度都是为0.1mg/L时增殖倍数最高。从苗的质量和增殖倍数2个方面考虑，认为MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L培养基作为继代增殖培养基较好。　　2.3不同激素组合对建青黛生根的影响　　当建青黛组培苗长至高2～3cm时切下接入生根培养基中。培养15d后，根尖开始冒出。培养25d时，组培苗的生根情况见表3。从表3可以看出，8种培养基都能促进生根，最佳的建青黛生根培养基为6-BA0.2mg/L+NAA0.05mg/L+IBA0.05mg/L，生根率可达1

7、00%。　　2.4炼苗与移栽　　将已长根的组培苗小心地从培养瓶中取出，轻轻洗掉根部培养基，用多菌灵或甲基托布津浸泡30min后，移栽到泥炭土∶珍珠岩体积比为3∶1的穴盘中，放入盖有薄膜和遮阳网的大棚中管理。棚内保持温度20～25℃，相对湿度70%～80%，成活率可达95%以上。炼苗304d左右，当幼苗长至7～10cm即可移栽到大田中，一般选择春、秋季进行炼苗与移栽。　　3结论与讨论　　试验通过建青黛顶芽诱导、增殖、生根等培养，建立了建青黛工厂化快速繁殖体系，解决了青黛种源退化的问题。张利英等[6]用草莓组培苗和自繁苗进行比较，结果表明：草莓组培苗在植