资源描述：
《藻毒素复合污染对鱼体的免疫毒性研究【开题报告】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、毕业论文开题报告环境科学藻毒素复合污染对鱼体的免疫毒性研究一、选题的背景和意义1.选题背景湖泊富营养化导致的蓝藻水华已成为国内外普遍关注的环境问题，它所带来的主耍危害Z—是产生的藻毒素对鱼类的影响。在［1发现的藻毒素屮，微囊藻毒素(MCs)的分布广、毒性大、危害严重，而备受关注。阐述了MCs对鱼类的影响。微囊藻毒索能干扰胚胎的发育，降低孵化率，增加畸形率，影响存活率，胚胎孵化受微囊藻毒素影响还具有剂量依赖效丿野外室内实验均表明尙类暴露于微囊藻毒素后不仅可在肝脏中富集还可在肌肉、肠道等组织器官中快速积累；对鱼类进行组织病理检测发现MCs可导致肝脏、肾脏、心脏、脑、鲍等组织受
2、损；MCs在鱼体中的解毒过程可能开始于由谷胱甘肽S・转移酶催化的还原型谷胱甘肽的结合反应；MCs还可影响鱼类的生长、行为和血清生化指标，此外，还具有一定的免疫毒性。2.选题意义通过比较两种不同的MCs对鱼的毒效应及鱼不同组织对MCs生化响应的差异，探讨并归纳MCs的转运机制和分了作用机制以及在食物链中传递过程中对人类造成的潜在影响。为探讨MCs的致再机理以及对人体的危害提供进一步的参考依据。二、研究目标与主要内容1.研究目标两种典型微囊藻毒素MCLR和MCRR体外低剂量复合条件下对尙体的免疫毒性影响。2•主耍内容(1)藻毒素MCLR单一作用下对鱼体免疫细胞毒性；(2)藻毒
3、索MCRR单一作用下对鱼体免疫细胞毒性；(3)不同浓度MCLR和MCRR复合作用下对血体免疫细胞毒性；三、拟釆取的研究方法、研究手段及技术路线、实验方案等1.1研究对彖质量为一斤左右的鲫鱼若干，在实验室驯养一段时间之后，使得鱼的一般性状都基木相同Z后才作为被研究的对象。1.2实验方法取鲫鱼体屮主要免疫器官肾脏和脾脏，剪碎之后，作为样詁采集。25mL烧杯装一定量的PBS待用，用酒精棉将鱼休消毒。从排泄口至胸鳍，然后沿胸鳍及排泄口垂直剪至背部，将鱼肚沿剪切线向外翻，观察到内脏里冇两条暗红色组织即脾脏。小心用弯头铁了取出至PBS中，取完Z后用铁了弯头处将内脏拉至肚了外面会在背部
4、发现两块对称的有薄膜包背的组织，即肾脏。小心取用手术剪剪断连着的线，至此，杀仇取脏步骤完成。1.3样品的实验室制备(1)用PBS漂洗至溶液基本透明，烧去多余的血及杂质。(2)用手术剪将取出物剪碎，剪5min以上，剪成匀浆状。(3)用100目不锈钢网筛过滤至小烧杯中50mL,将25mL润洗后一并倒入至64mL左右分离液。(4)取16根无菌试管，分别加入4mL淋巴细胞分离液，然后沿试管壁小心慢慢加入4mL细胞悬液(混匀)必须保证溶液的上下分层。加的时候耍越慢越好。(5)离心设定：4000r•min'1,离心20min。(6)小心仔细吸收交界处呈乳白状云雾层尙新试管屮，再次离心
5、5min,去除上清液。(7)取适量于Nikon显微镜下计数，结果每小格二6个，细胞密度为6X400X104.(8)将细胞接种于24孔板，密度为1.8X106个/mL/孔，14孔于27°C培养箱屮培养待用。(ImL)(9)取MCCR20mg/L,配置1Ug/L,10Ug/L,50ug/L,100ug/L,500Ug/L,1000Ug/L处理，诱导12小时，准备2个平行样。(1)12小时后，小心将培养液离心(2000G10min)弃上清液。(为避免失败，取/3屯泳，后备用)1.4DMA损伤实验研究方法取3.2.2中步骤6淋巴细胞(106cell/mL)用受试毒素(3.1.2)
6、处理12h后,用爱思进公司DNA小量提取试剂盒提取淋巴细胞DNA,运用琼脂糖凝胶电泳法:制0.8%琼脂糖凝胶，后按澳酚蓝：DNA1:1加样，110V,电泳30min后EB染色,观察，分析毒素对DNA损伤情况。1.5分析检测方法1.5.1运用细胞活性MTT检测法，对毒素作用下淋巴细胞的存活率进行检测。1.5.2运用透射屯镜观察毒索作用下，鱼体淋巴细胞的凋亡情况。1.5.3运用琼脂糖凝胶电泳技术检测藻毒素对淋巴细胞DNA的损伤情况。四、参考文献[1]WorldHealthOrganization.Algaeandcyanobacteriainfreshwater//Guide
7、linesforsaferecreationalwaterenvironments,Vol1.coastalandfreshwaters.Geneva,Switzerland,2003:136-15&[2]DittmannE,NeilanBA,BornerT.InsertionalmutagenesisofapeptidesynthetasegenethatisresponsibleforhepatotoxinproductioninthecyanobacteriumMicrocystisaeruginosaPCC7806.M
