筒孢藻毒素对鱼体免疫细胞的毒性研究【毕业论文】

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1、本科毕业论文（20届）筒砲藻毒素对鱼体免疫细胞的毒性研究摘要：本实验采用离体细胞培养诱导方法,研究了筒孑包藻毒素(cylindrospcrmopsin)在浓度(0.1、1、10、100Mg/L)下对鲫鱼淋巴细胞的毒性效应。结果表明：鲫鱼淋巴细胞经筒泡藻毒素体外诱导6h后，出现了细胞核固缩的典型细胞凋亡形态学特征；琼脂糖凝胶电泳检测到明显的细胞凋亡的生物化学特征DNA(DNALadder)；并且筒孑包藻毒素诱导的细胞凋亡呈剂量•效应关系。该研究表明筒泡藻毒素可导致鱼类淋巴细胞产生凋亡，对鱼体免疫细胞有毒效应，故而可能影响鱼类免疫功能

2、。关键词：筒泡藻毒素；免疫；毒性；Toxicityofthecruciancarp(Garassiusauratus)lymphocytesinducedbycylindrospermopsinAbstract：Theexistenceofapoptosisbycylindrosperniopsin(CYN)isisolatedlymphocytesfromthecruciancarp(Garassiusauratus)atconcentration(0.1-100ng/L)wasexplored・Apoptosiswasdete

3、ctedinvitroandwasclearlydistinguishedbycondensationofnuclearchromatin,after6hexposureat10>100

4、ig/LCYN,respectively.AgarosegelelectrophoresisfurtherrevealedDNAfragmentation(DNAladder)causedbyapoptosis.Furthermore,dose-responsecurvesforthedeathrateshowedanobviousapoptos

5、isincreaseinadosedependent.Theresultsindicatedthatcylindrospermopsincouldinducelymphocyteapoptosisandmightimpairfishimmunefiinction.Keywords：Cylindrospermopsin;Immune;Toxicity1弓I言••••••••2材料方法2.1试剂22.2主耍仪器22.3实验鱼种22.4淋巴细胞的提取2••••••••32.5细胞毒性MTT测定2.6透射电镜细胞超微结构观察32.7细胞凋

6、广典型电泳特征DNAladder的测定32.8数据处理33结果33.1筒抱藻毒素对尙体淋巴细胞毒性剂量■效应关系33.2筒他藻毒素对鱼体淋巴细胞超微结构观察43.3筒抱藻毒素对DNA的影响44讨论55结论6••••••••致谢错误！未定义书签。参考文献:1引言自1878年，澳人利亚学者Francis首次报道蓝藻水华暴发示的水体有毒⑴，之后世界范围内不断有报道淡水水体发牛水华。如1996巴&Tabocas水库眾发水华，导致Camar透析中心117名患者中超过50人死亡⑵。我国著名水体太湖、滇池、大明湖等均有报道水华发生。而相伴水华释

7、放的藻毒素亦成为科研匸作者的研究重点。研究表明世界各地50%-75%的水华可产牛毒索〔現筒砲藻毒素首次发现是在澳大利亚昆丄兰州的一个棕櫚岛上的一次神秘疾病的爆发，此次爆发是山于筒砲藻在当地居民饮用水里开花，产牛毒素⑷。筒孑包藻毒素（简称CYN或CYL）是多种淡水蓝藻中的一种。CYN是一种含有硫酸弧的多环尿咳喘衍生物。它也是两性离子,具冇很高的水溶性⑴。CYN的毒性作用于肝脏和肾脏组织，通过抑制蛋白质的合成来破坏DNA和RNA的修复。经过分析，在1992年正式提出了英化学结构⑹。鱼体是水生生态系统屮较为低等的动物，极易受到水体污染的

8、影响，产生多种生态效其中血体免疫系统是对污染胁迫应激的主要反应体系之一⑶。筒孑包藻毒索主要山藻华有毒蓝藻产生，并分泌在水体中，会影响鱼体免疫系统的健康⑺。本研究选用藻食性鲤科鱼鲫鱼为材料，采用体外诱导方法研究筒砲藻毒素对鲫鱼淋巴细胞的毒性效应，旨在揭示筒抱藻毒素对尙类的免疫毒性机制。OISIOOHCylindrospermopsin图i.筒砲藻毒素分子的二维结构图2.筒抱藻毒素分了的三维结构2材料方法2.1试剂筒抱藻毒素(Cylindrospeimopsin)购自美国Sigma公司；FBS(胎牛血清)、RPMI1640培养基、淋巴

9、细胞分离液购自上海生工公司。2.2主要仪器SigmaiKj速冷冻离心机，牛:化培养箱，普通光学显微镜，荷兰PhilipTeena透射电镜，电泳装置，Kodka凝胶成像系统。2.3实验鱼种试验用鲫鱼购口浙江省水产研究所，平均体长25cm,平均体质量2