膜电位及mapk磷酸化在飞燕草素抑制ox-ldl诱导的血管内皮细胞氧化损伤中的作用

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1、膜电位及MAPK磷酸化在飞燕草素抑制Ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤中的作用基金项目：国家自然科学基金重点项目（30730079），“十一五”国家科技支撑计划（2008BAI58B06），重庆市营养与食品安全重点实验室科技创新能力建设资助项目（2006CA1003）SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(30730079),the“EleventhFive-yearPlan”forNationalKeyTechnologyR&DProgram(2008BAI58B

2、06),andtheInnovationProjectofChongqingKeyLaboratoryofNutritionandFoodSafety（2006CA1003）作者简介：金鑫，女，辽宁省沈阳市人，硕士研究生，医师，主要从事营养与心血管疾病方面的研究。电话：（023）68752291，E-mail:jinxin983@yahoo.cn.通信作者：糜漫天，电话:(023)68752292，E-mail:mimt@sina.com.金鑫，易龙，陈春烨，糜漫天（第三军医大学预防医学院营养与食品安全研究中心，重庆市医学营养研究中心，

3、重庆市营养与食品安全重点实验室，重庆400038）摘要：目的　观察飞燕草素（Delphinidin-3-glucoside，Dp-3-glc）对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的血管内皮细胞株EA.hy926的氧化应激损伤、细胞膜电位和线粒体膜电位改变及p38MAPK磷酸化的影响，探讨其抑制内皮细胞氧化应激的分子机制。方法　不同浓度（25、50、100、200μmol/L）的Dp-3-glc预处理内皮细胞2h后，Ox-LDL（100μg/ml）继续处理24h，MTT法检测细胞活力；细胞培养上清液LDH、NO、MDA水平及细胞匀浆SO

4、D酶活性采用试剂盒分别检测；荧光探针DCFH-DA标记细胞内活性氧（ROS）、膜电位敏感的阳离子荧光探针DiSC3(5)和阴离子荧光探针DiBAC4(3)分别标记细胞膜电位，罗丹明-123标记线粒体膜电位，激光共聚焦显微镜分别检测荧光强度；Westernblot法检测细胞内p38MAPK的磷酸化水平。结果　Dp-3-glc能明显抑制Ox-LDL诱导的内皮细胞MDA和LDH生成增加、NO分泌减少及细胞内SOD酶活力降低，并显著减少细胞内活性氧（ROS）生成。实验发现Ox-LDL能明显诱导细胞膜电位升高和线粒体膜电位下降，及增强膜电位相关的

5、p38MAPK的磷酸化水平，而Dp-3-glc预处理能明显减弱Ox-LDL诱导的膜电位改变，并抑制p38MAPK的磷酸化。结论　Dp-3-glc可能通过影响细胞膜电位和线粒体膜电位，及膜电位相关的p38MAPK的磷酸化水平，削弱Ox-LDL诱导的内皮细胞氧化应激损伤。关键词：飞燕草素葡萄糖苷；动脉粥样硬化；氧化低密度脂蛋白；血管内皮细胞；膜电位；p38MAPK中图法分类号：文献标识码：AEffectofmembranepotentialandMAPKphosphorylationontheinhibitionofOx-LDL-induc

6、edinjuryinvascularendothelialcellsbydelphinidin-3-glucosideJINXin,YILong,CHENChun-ye,MIMan-tian（ResearchCenterforNutritionandFoodSafetyofTheThirdMilitaryMedicalUniversity,ChongqingMedicalNutritionResearchCenter,ChongqingKeyLaboratoryofNutritionandFoodSafety,Chongqing4000

7、38）Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofdelphinidin-3-glucoside(Dp-3-glc)ontheoxidizedinjury,alterationofmembranepotentialandmitochondriapotential,andp38MAPKphosphorylationofvascularendothelialcelllineEA.hy926inducedbyOx-LDLandexplorethemolecularmechanismoftheinhib

8、itoryeffectofDp-3-glconendothelialoxidizedinjury.MethodsEndothelialcellswerepreincubatedfor2hwithdiffer