霉酚酸酯抑制转化生长因子-β在肺成纤维细胞中的表达及应用价值

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1、霉酚酸酯抑制转化生长因子-β在肺成纤维细胞中的表达及应用价值王颖，万，跃，谭兵，蒋勇，白玉，吴永忠(400030重庆，重庆市肿瘤研究所放疗科)[摘要]目的探讨霉酚酸酯（mycophenolatemofetil，MMF）抑制转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）在肺成纤维细胞WI26中的表达和应用价值。方法肺成纤维细胞WI26常规细胞培养后分4组：对照组、MMF组、TGF-β组、MMF+TGF-β组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β介导相关基因COL1A1的表达，Westernblot和氯霉素乙酰

2、基转移酶实验(chloramphenicalacetyltransferase，CAT)方法检测COL1蛋白的表达；胶原基质收缩试验和细胞伤痕试验观察胶原纤维的收缩和细胞移行能力的差异。结果MMF作用细胞24、48h后，COL1A1mRNA表达分别为对照组的（77.0±2.9）%和（38.0±3.7）%（P均<0.05），MMF降低了COL1A1mRNA水平；TGF-β作用细胞24、48h后，COL1A1mRNA表达分别为对照组的（134.0±3.1）%和（189.0±2.4）%（P均<0.05），TGF-β提高了COL1A1mRNA水平；MMF+TGF-β作

3、用细胞24，48h后，COL1A1mRNA表达分别为对照组的（95.0±2.7）%和（71.0±3.3）%（P均<0.05），48h后MMF阻止了TGF-β诱导的COL1A1mRNA表达。48h后MMF组COL1蛋白表达为对照组的（44.0±1.9）%（P<0.05）；TGF-β组COL1蛋白表达为对照组的（145.0±1.5）%（P<0.05）；MMF+TGF-β组COL1蛋白表达为对照组的（79.0±2.5）%，MMF阻止TGF-β诱导的COL1蛋白表达。胶原基质收缩试验（第0﹑1﹑5天观察）和细胞伤痕试验（第0﹑8﹑24小时观察）结果显示：MMF重建成纤

4、维细胞的接触抑制生长。结论MMF能阻止TGF-β介导的细胞纤维化。[关键词]MMF；转化生长因子-β；肺成纤维细胞WI26[中图法分类号][文献标志码]ATostudytheabilityofMycophenolatemofetiltoantagonizetheprofibroticofTGF-βinfibroblastcelllinesWangYing,WanYue,TanBing,JiangYong,WuYongzhong（TheChongqingCancerInstitute,Chongqing400030,China）【Abstract】　Objeci

5、tve:TostudytheabilityofMMF(Mycophenolatemofetil)toantagonizetheprofibroticofTGF-β(Transforminggrowthfactor-β)infibroblastcelllines(WI26cells)andexplorenewmethodforthetreatmentofradiationpneumonitis.Method：TheexpressionofCOL1A1mRNAwasmeasuredbyusingreversetranscriptase-polymerasechai

6、nreaction(RT-PCR);TodetectetypeIcollagenproductionbyusingWesternBlot;CAT(ChloramphenicalAcetylTransferase)assaywasusedtostudyCOL1transcriptionnalactivity;Experimentalcontraction(MMFandTGFaffectcellcontractility)wasstudedusingfreecollagenlatticeassay;Scratchassayistoobservatethecapac

7、ityofcelltransition.ResultTGF-βincreasesCOL1A1mRNAlevels.TGF-βactsonWI26cell24hours,48hours,COL1A1mRNAexpressioninthecontrolgroupwere134%±0.031(P<0.05)and189%±0.024(P<0.05);MMFreducedCOL1A1mRNAlevels,MMFactsonWI26cellfor24hours,48hours,COL1A1mRNAexpressioninthecontrolgroupwere77%±0.

8、029(P<0.05)and38%±0