过表达morc2通过下调p53含量抑制l02肝细胞脂肪变性

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1、DOI：10.16016/j.1000-5404.201502051过表达MORC2通过下调p53含量抑制L02肝细胞脂肪变性王涛，雷增杰，王斌，李青，王春华，刘琴，魏艳玲，王军，陈东风（400042重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化内科）[摘要]目的研究过表达MORC2对人L02肝细胞脂肪变性程度的影响及可能机制。方法利用慢病毒转染技术在L02肝细胞中过表达MORC2，qRT-PCR及Westernblot鉴定过表达效果后，对L02肝细胞进行脂肪变性诱导，测定细胞甘油三酯（triglyceride，TG

2、）含量并比较过表达前后L02肝细胞的脂肪蓄积程度；利用芯片技术对过表达MORC2前后的基因表达谱进行检测与Pathway分析，筛选过表达MORC2时发生变化的通路并选择对脂代谢有调控作用的p53进行研究；Westernblot检测在L02肝细胞脂肪变性诱导时过表达MORC2对p53蛋白含量的影响；在过表达MORC2的基础上对L02肝细胞过表达p53，qRT-PCR及Westernblot鉴定p53过表达效果后，通过TG测定观察过表达p53对过表达MORC2改变的L02肝细胞脂肪蓄积程度产生的影响。结果qRT-PCR

3、及Westernblot证明过表达MORC2成功；过表达MORC2的L02肝细胞在脂肪变性诱导后TG含量较MORC2正常表达的L02肝细胞明显降低（P<0.01）；基因表达谱芯片及Pathway分析显示脂代谢调控相关的p53通路在过表达MORC2后发生变化；Westernblot显示过表达MORC2后，L02肝细胞中p53蛋白水平在脂肪变性诱导前后均降低；qRT-PCR及Westernblot验证p53过表达成功，且过表达p53可部分解除MORC2对L02肝细胞脂肪变性的缓解作用。结论过表达MORC2可通过下调p5

4、3从而缓解肝细胞脂肪变性。[关键词]非酒精性脂肪性肝病；脂肪变性；L02肝细胞；MORC2；p53[中图法分类号]R322.47；R329.25；R363.2[文献标志码]AOverexpressionofMORC2attenuatessteatosisofL02hepatocytesbydownregulatingp53abundanceWangTao,LeiZengjie,WangBin,LiQing,WangChunhua,LiuQin,WeiYanling,WangJun,ChenDongfeng(Depa

5、rtmentofGastroenterology,InstituteofSurgeryResearch,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400042)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofMORC2overexpressiononsteatosisofimmortalizedhepatocytecelllineL02andthepotentialmechanisms.Methods qRT

6、-PCRandWesternBlotwereappliedtoexamineoverexpressionofMORC2inlentivirus-transfectedL02hepatocytes.Intracellulartriglyceride(TG)wasmeasuredtoevaluatecellularsteatosis.MicroarraychipwasperformedtoanalyzesignalingpathwaysthatweremodulatedinMORC2-expressingL02cell

7、s.Wefurtherexaminedoverexpressionofp53proteinlevelbywesternblotinMORC2-overexpressingL02cellsbeforeandaftersteatosisinduction.ResultsBothqRT-PCRandWesternBlotdatavalidatedrobustincreasesinmRNAandproteinlevelsofMORC2inlentivirus-transfectedL02hepatocytes.Steato

8、sislevelwassignificantlyalleviatedbyMORC2overexpression(P<0.01).Bioinformaticanalysisofmicroarraydatarevealedthatlipometabolism-regulatingp53pathwaywasregulatedinMORC2-overexpressi