急性早幼粒细胞白血病pmlrarα融合基因筛查及实时定量检测平台的建立

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1、急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因筛查及实时定量检测平台的建立第一作者：康志杰，女，主治医师，E-mail：cathie1997@sina.com﹡通讯作者：闫金松教授，E-mail：yanjsdmu@gmail.com通讯地址：大连医科大学附属二院血液科辽宁大连116021本研究受大连医科大学附属第二医院青年基金资助康志杰，崔嵩，李莉，高贝贝，黄丹，陈雪瑜，高源，杨岩，闫金松﹡摘要目的针对90%以上的急性早幼粒细胞白血病（acutepromyelocyticleukemia，APL）患者表达的PML/RARα融合基因，设计引物及探针，对APL患者进行基

2、因筛查，并构建PML/RARα环形质粒作为标准品，建立APL患者PML/RARα融合基因检测及微小残留病变监测的诊断平台，为APL患者的诊治提供分子生物学依据。方法依据GenBank中编码PML/RARα及ABL的基因序列，设计实时定量引物及Taqman探针，对APL患者进行基因筛查，并以PML/RARαL型及S型阳性的APL患者cDNA为模板，应用PCR技术扩增出453bp和550bp的基因片段，连入pMD18-T载体；以pMD18T-PML/RARα（L）及pMD18T-PML/RARα（S）作为标准品，计算拷贝数，梯度稀释后作为模板，做PML/RARα及AB

3、L的标准曲线，运用实时荧光定量（Real-timequantitativePCR，RQ-PCR）技术对该基因转录本水平的变化情况进行监测。结果成功构建pMD18T-PML/RARα质粒标准品，应用RQ-PCR技术，以ABL为内参，应用Taqman探针法，对APL患者标本进行检测，技术可行，数据稳定，成功构建APL融合基因检测及微小残留病变监测的诊断平台，应用于临床病人的基因诊断，对APL的诊治提供了可靠的分子依据。结论依托分子生物学技术，通过先期筛查，确定患者PML/RARα融合基因阳性亚型，再以自行构建的PML/RARα环形质粒为标准品，以ABL基因为内参，应用

4、Taqman探针法，有针对性的实时监测PML/RARα融合基因的表达情况，经济、快速，敏感性好，稳定性高，可操作性强，且首次基因筛查可降低医疗成本，对临床检验具有普遍意义，值得推广。关键词:PML/RARα；标准品；基因筛查；实时荧光定量；诊断平台：急性早幼粒细胞白血病·ThedevelopmentofadiagnosisplatformforscreeningandrealtimequantitationofPML/RARαfusiongeneinacutepromyelocyticleukemia1KangZhijieCuisongLiiGaoBeibeiHu

5、angdanChenXueyuYanJinsong*1Hematologydepartment,SecondHospitalAffiliatedDalianMedicalUniversity,DalianLiaoning116021ABSTRACTObjective:Toimproveclinicaldiagnosisandtreatmentofacutepromyelocyticleukemia(APL)，weaimedtoestablishedadiagnosisplatformfordetectingPML/RARαfusiongeneandmornitor

6、ingminimalresidualdiseasebyconstructingacircularplasmidusingPML/RARαfusiongeneasastandard.Method:WedesignedprimersandTaqmanprobesspecifictoPML/RARα（L,S）andABL,andusedcDNAoftheAPLpatientasthetamplatetoamplifyaPML/RARαfragment.The453bpand550bpPCRproductofPML/RARαwasclonedintopMD18Tvecto

7、randusedasareferencestandard.Thecopynumberswasthendeterminedandstandardcurvederived.ThetranscriptionalexpressionofPML/RARαinbonemarrowsamplesfrompatientswasquantitatedbyreal-timequantitativePCR(RQ-PCR).Results:WeconstructedacircularplasmidwithPML/RARα(L,S)fusiongeneaccordingtothemetho

8、dfrom