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1、丹参对胆道损伤修复过程中α-SMA表达的影响及其意义王得胜，刘莉，李建国，杨楷（563003贵州遵义，遵义医学院附属医院肝胆外科）问题7：请精简全文，控制在此版式下1.5个页面。[基金项目：]贵州省卫生厅科学技术基金项目（黔卫发[2009]122号）*通讯作者：li88li@yeah.net563003问题2：参照本刊格式完善通信作者信息。问题1：现在肇庆市第一人民医院外科，在作者简介里提及。胆管损伤后愈合常见的并发症为瘢痕挛缩和管腔狭窄,其后果严重,治疗颇为棘手，如何防治胆道损伤修复后发生瘢痕狭窄具有
2、重要意义。已有研究证明胆管损伤后最主要的修复细胞是肌成纤维细胞（Myofibroblast,MFB）,其功能持续活跃存在,可导致胆管瘢痕挛缩及良性胆管狭窄形成，而α-SMA是其存在的标志[1-2]。国内多项研究证明丹参具有促进创伤组织修复，和良好的抑制瘢痕增生的作用[3-4]。本研究在犬胆管损伤早期应用丹参粉针剂，比较观察丹参对胆管损伤愈合瘢痕中α-SMA表达的强度影响，探讨丹参对胆道损伤修复的作用。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物:本地杂交犬96只,不分雌雄不拘,平均体重质量（14.5±1
3、.5）kKg。1.1.2试剂：注射用丹参冻干粉针剂（哈药集团中药二厂生产，批号：090331）；，免疫组化抗体为鼠抗人平滑肌肌动蛋白免疫组化单克隆抗体(福州迈新生物技术公司)；，S-P超敏试剂盒和DAB显色试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司、武汉中美科技生物技术有限公司）。1.1.3仪器：LeicaDM2500M正置金相显微镜（德国）；，LeicaQwin细胞图像分析仪（德国）。1.2实验方法1.2.1实验犬随机分组：正常组30只；损伤组30只；实验组30只（后续补充在实验中因各种原因缺失的犬6只）。1
4、.2.2胆管模型的制作：实验犬均以0.25%戊巴比妥钠(1mL/kg)腹腔内注射诱导麻醉。经右上腹腹直肌切口入腹,正常组只作腹腔探查(排除腹腔肿瘤或腹水等),以少量生理盐水冲洗腹腔后,直接关腹;损伤组和实验组探查腹腔无异常后,先于距十二指肠上缘2cm处游离出胆总管(上下游离范围不超过1cm),横向切开胆总管前壁,范围不超过胆总管两侧纵轴,用显微外科技术以5/0不可吸收缝线作粘膜对粘膜外翻全层吻合,留较长线尾做标识。探查吻合口无渗漏后关腹。术后预防应用抗生素3d天。实验组术后在圈饲养期间的前10d天，每天
5、腹腔注射丹参粉（0.4g/Kkg）生理盐水(丹参粉/生理盐水=8g/10ml)溶液。1.2.3标本采集：三3组分别于术后3天d、1周w、2周w、1个月m、3个月m时随机选出6只处死开腹，正常组直接取出胆管标本,损伤组和实验组以残存丝线标识处为中心,切取约0.5cm长的胆管组织块。1.2.4切片制作和图像分析：免疫组织化学S-P（streptavidin-perosidase）法制作切片。利用LeicaQwin细胞图像分析仪,在高倍镜视野下观察切片的组织结构形态,每张切片按“米”字型在视野里分8个不同区域
6、进行观察计数单位面积内的α-SMA阳性细胞数，计算出这些区域的阳性细胞数与面积的比值，统一换算成百分比制并作为原始数据，每份标本的观察结果取其8个区域记数的均数。排除非特异性染色的前提下以细胞膜和/或细胞质出现黄色、棕黄色、浅褐色颗粒为阳性标记[5]。1.3统计学方法所有数据以表不示，应用SPSS16.0统计分析软件进行统计学分析。，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意。2结果2.1术后实验犬的一般情况正常组无死亡；损伤组于术后当天因为麻醉过深死亡1只，术后第3天因胆漏、腹腔感染死
7、亡1只；实验组于术后第2天1只发生腹壁伤口裂开，终止其实验,术后第3、5天因胆漏并腹腔感染各死亡1只，于术后28天因胆管闭锁并胆管炎死亡1只；实验中缺失的犬后续实验继续补充。其他实验犬术后2～3d恢复进食,食欲、精神、反应均尚可。在术后3天、1周、2周、1个月、3个月采集标本,均见损伤处胆管与周围组织有粘连。损伤部位以上的胆管有不同程度的扩张。2.2病理切片HE染色的观察正常组各层组织纹理清析，胆管粘膜层及纤维肌层外膜层，排列有序；在损伤组和实验组组织紊乱无序，组织层次不清，细胞外基质明显增多(图1)。
8、ABCDEA：对照组；B：损伤组7d；C：实验验组7d；D：损伤组3个月；E：实验组3个月图1胆管及其愈合瘢痕组织HE染色观察(×100)问题3：参照本刊格式插入图。2.3免疫组化切片的观察正常组各层组织纹理清析，排列有序，胆管粘膜固有层及粘膜下层有少量黄色、棕黄色颗粒分布；损伤组和实验组组织紊乱无序，整个切片均见多量黄色、棕黄色、浅褐色颗粒分布图2。FGHIJF：正常组；G：损伤组3d；H：实验验3d；I：损伤组3个月；J：实验组3个月图
