orc1基因rna干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型影响

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1、ORC1基因RNA干扰对大鼠血管平滑肌细胞表型影响李建涛国家自然科学基金资助项目(No.30470727)作者简介：李建涛(1979-)，男，河南省漯河市人，硕士研究生，住院医师，主要从事动脉粥样硬化发病机制的基础研究，电话13650567212。woshilijiantao.student@sina.com▲通讯作者：舒茂琴，电话：(023)68765671，E-mail:Shumaoqin@sina.com，舒茂琴1▲，冯媛媛（第三军医大学西南医院心血管内科，重庆市介入心脏病学研究所，重庆，400038）摘要

2、：目的　以RNA干扰抑制血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)ORC1基因,探讨ORC1基因表达抑制后VSMCs表型的改变。方法　实验设置正常对照组、阴性siRNA组及阳性siRNA组。应用Westernblot检测ORC1基因表达的变化；免疫荧光染色后激光共聚焦显微镜观察细胞形态结构；应用流式细胞仪检测细胞表型标志蛋白表达。结果　①siRNA转染后，阳性siRNA组ORC1基因表达水显著降低，而正常对照组及阴性siRNA组间ORC1基因表达水平无显著差异。②siRNA转

3、染后，阳性转染组细胞呈现收缩型形态特征，空白对照组及阴性对照组细胞呈现合成型形态特征③siRNA转染使ORC1表达减弱后，VSMCs收缩型标志物α平滑肌肌动蛋白（α-SMactin）和平滑肌肌动蛋白重链2（SM-2）表达水平明显升高，合成型标志物骨桥蛋白（Osteopontin）表达水平明显降低，空白对照组及阴性对照组间三种标志物表达水平无显著差异。结论　RNA干扰介导的ORC1基因沉寂可促使VSMCs由合成型向收缩型转变。关键词:ORC1；RNA干扰；血管平滑肌细胞；表型EffectofRNAinterfere

4、nceforORC1geneonphenotypeofvascularsmoothmusclecellsinratsLIJian-Tao，SHUMao-qin，FENGYuan-yuan，(DepartmentofCardiology，SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstrct:ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofRNAinterferencetargetingOR

5、C1geneonthephenotypeofvascularsmoothmusclecells(VSMCs)inrat.MethodsVSMCsweretransfectedwithsiRNAtargetingORC1genebyliposome.The8expressionofORC1proteinwasdetectedbyWesternblotting.Thechangesofphenotype-dependentmarkerswasanalyzedbyflowcytometry.ResultsAftertr

6、ansfectedofthepairofsiRNAtargetingORC1genes,theexpressionofORC1waslowerthanthatinthecontrolgroup(nontransfectionandnegativesiRNA).ORC1genesilencingevokeddrasticchangesincharacteristicsoftheVSMCde-differentiatedphenotype,includingVSMCmorphologyandtheexpression

7、ofphenotype-dependentmarkersinfavorofdifferentiation.ConclusionORC1genesilencedbyRNAintereferencecanmediatethetransitionofVSMCsfromsyntheticphenotypetocontractilephenotype.Keywords:ORC1;RNAinterference;vascularsmoothmusclecell;phenotype　中图法分类号:R322.12；R329.28

8、；R394.2　　　文献标识码:A血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)的增殖是动脉粥样硬化（AtherosclerosisAs）、经皮冠状动脉介入治疗术后（PercutaneousCoronaryIntereventionPCI）再狭窄等血管疾病的主要病理特征，血管平滑肌细胞表型的转化是平滑肌细胞增殖和迁移的关键性起始步骤[1]