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《人关节软骨来源cd105cd166间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人关节软骨来源CD105+/CD166+间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定常红星,杨柳,李忠,陈光兴,刘军,文亚名,戴刚(第三军医大学西南医院关节外科中心,重庆400038)摘要:目的建立免疫磁珠技术高效分选人关节软骨CD166+/CD105+间充质干细胞(MSCs)的方法,并鉴定其多向分化特性。方法酶消化法获取5例手术切除的膝关节软骨组织细胞,并行原代和传代培养;流式细胞仪检测其中CD166+/CD105+细胞百分比。比较免疫磁珠连续法与间断法分选P4培养细胞中CD166+/CD105+细胞的所需时间、分选细胞活度及其百分比和收
2、获率。对连续法分选CD166+/CD105+细胞进行成骨、成软骨、成脂肪诱导,Gomori钙钴法碱性磷酸酶(ALP)、Ⅱ型胶原免疫组化、油红O染色检测其分化特性。结果人关节软骨组织分离细胞和原代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比较低[(1.13±0.68)%、(5.16±3.59)%],传代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比随传代次数增加而明显增高[P2、P4、P6培养细胞中CD166+/CD105+细胞百分比分别为(12.68±2.59)%、(17.81±3.80)%、(19.36±3.93)%](P<0.
3、05),传代培养至P4代后,其CD105+/CD166+细胞百分比相近(P>0.05)。连续法分选CD166+/CD105+细胞成骨诱导后ALP染色阳性,成软骨诱导前II型胶原弱阳性、诱导后II型胶原阳性,成脂肪诱导后细胞内可见脂肪滴、油红O染色阳性。结论人关节软骨P4、P6培养细胞中的MSCs比例较高。免疫磁珠连续法能够高效分选人关节软骨MSCs,所分选的MSCs具有成骨、成软骨及成脂肪分化功能。关键词:人关节软骨;CD166+/CD105+;间充质干细胞;免疫磁珠;细胞分选中图法分类号:文献标识码:AImmunomagneticse
4、parationanddifferentiationofmesenchymalstemcellsinhumanarticularcartilageCHANGHong-xing,YANGLiu,LIZhong,LIUJun,CHENGuang-xing,WENYa-ming,DAIGang(CentreforJointSurgery,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:ObjectiveToestablishasim
5、pleandfeasiblemethodofimmunomagneticseparationofCD166+/CD105+mesenchymalstemrcells(MSCs)fromhumanarticularcartilage.MethodsTheCD166+/CD105+MSCsinchondrocytesisolatedandculturedfromhumankneearticularcartilagewithprimaryosteoarthritic(OA)wereanalyzedbyflowcytometryjustafte
6、rdigested,passage0,passage2,passage4andpassage6.ThetwotechniquesofimmunomagneticseparationofCD166+/CD105+MSCsfromthepassage4chondrocytesculturedwereevaluatebyseparationtime,cellactivity,CD166+/CD105+MSCratioanditscellharvestingratio.ThetwotechniquesincludedtheAlsalamehtw
7、ostagemethodandtheourcontinuousprocess.ThepotentialofCD105+/CD166+cellstodifferentiatetoadipogenic,osteogenic,andchondrogeniclineageswasanalyzedafterimmunomagneticselectionbyhistochemistryandimmunohistochemistry.ResultsTheCD105+/CD166+MSCratiosinthechondrocytesjustafterd
8、igested,passage0,passage2andpassage4were(1.13±0.68)%,(5.16±3.59)%,(12.68±2.59)%and(17.81±3.80)%respecti