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1、人关节软骨来源CD105+/CD166+间充质干细胞的分选及其多向分化特性的鉴定常红星，杨柳，李忠，陈光兴，刘军，文亚名，戴刚（第三军医大学西南医院关节外科中心，重庆400038）摘要：目的建立免疫磁珠技术高效分选人关节软骨CD166+/CD105+间充质干细胞（MSCs）的方法，并鉴定其多向分化特性。方法酶消化法获取5例手术切除的膝关节软骨组织细胞，并行原代和传代培养；流式细胞仪检测其中CD166+/CD105+细胞百分比。比较免疫磁珠连续法与间断法分选P4培养细胞中CD166+/CD105+细胞的所需时间、分选细胞活度及其百分比和收
2、获率。对连续法分选CD166+/CD105+细胞进行成骨、成软骨、成脂肪诱导，Gomori钙钴法碱性磷酸酶（ALP）、Ⅱ型胶原免疫组化、油红O染色检测其分化特性。结果人关节软骨组织分离细胞和原代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比较低[（1.13±0.68）%、（5.16±3.59）%]，传代培养细胞中的CD105+/CD166+细胞百分比随传代次数增加而明显增高[P2、P4、P6培养细胞中CD166+/CD105+细胞百分比分别为(12.68±2.59)%、（17.81±3.80）%、（19.36±3.93）%]（P＜0.
3、05），传代培养至P4代后，其CD105+/CD166+细胞百分比相近（P＞0.05）。连续法分选CD166+/CD105+细胞成骨诱导后ALP染色阳性，成软骨诱导前II型胶原弱阳性、诱导后II型胶原阳性，成脂肪诱导后细胞内可见脂肪滴、油红O染色阳性。结论人关节软骨P4、P6培养细胞中的MSCs比例较高。免疫磁珠连续法能够高效分选人关节软骨MSCs，所分选的MSCs具有成骨、成软骨及成脂肪分化功能。关键词：人关节软骨；CD166+/CD105+；间充质干细胞；免疫磁珠；细胞分选中图法分类号：文献标识码：AImmunomagneticse
4、parationanddifferentiationofmesenchymalstemcellsinhumanarticularcartilageCHANGHong-xing,YANGLiu,LIZhong,LIUJun,CHENGuang-xing,WENYa-ming,DAIGang(CentreforJointSurgery,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract：ObjectiveToestablishasim
5、pleandfeasiblemethodofimmunomagneticseparationofCD166+/CD105+mesenchymalstemrcells（MSCs）fromhumanarticularcartilage.MethodsTheCD166+/CD105+MSCsinchondrocytesisolatedandculturedfromhumankneearticularcartilagewithprimaryosteoarthritic(OA)wereanalyzedbyflowcytometryjustafte
6、rdigested,passage0,passage2,passage4andpassage6.ThetwotechniquesofimmunomagneticseparationofCD166+/CD105+MSCsfromthepassage4chondrocytesculturedwereevaluatebyseparationtime,cellactivity,CD166+/CD105+MSCratioanditscellharvestingratio.ThetwotechniquesincludedtheAlsalamehtw
7、ostagemethodandtheourcontinuousprocess.ThepotentialofCD105+/CD166+cellstodifferentiatetoadipogenic,osteogenic,andchondrogeniclineageswasanalyzedafterimmunomagneticselectionbyhistochemistryandimmunohistochemistry.ResultsTheCD105+/CD166+MSCratiosinthechondrocytesjustafterd
8、igested,passage0,passage2andpassage4were（1.13±0.68）%,（5.16±3.59）%,（12.68±2.59）%and（17.81±3.80）%respecti
