菌株的使用保管制度

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1、江门市凯林贸易有限公司质管部实验室菌种的收集、使用、保管程序版本笫1版版次第1次修改页码受控状态受控编号1.目的：规范实验室菌种的收集、使用、保管程序；确保产品的检验质量和确保实验室安全。2.范围：木管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。3.职责3」菌种保管员：按照木指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作。3.2科室负责人：负责监督菌种的使用及管理。4.管理细则木实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体；保存的菌种主要用于各类培

2、养基、检测试剂的性能测试和质量控制。4.1在本实验室保管的菌种名保留工作菌种：人肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50()13、福氏志贺氏菌2aATCC12022>副溶血性弧菌200904-1、金黄色葡萄球菌ATCC25923.溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、克雷们氏杆菌、枯草芽胞杆菌ATCC6633b、白色念珠菌ATCC1023K4.2菌种的保管4.2.1实验室菌种保存于专用的冰箱。4.2.2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种。4.2.3菌种应按规定的时间定期转种，一般每转种3代后应该及时报废处理

3、。4.2.5保管人员工作变动时应作好交接工作。4.3菌种的使用和保存431菌种的类别4.3.1」实验宗内的标准菌种根据用途不同，分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。①储存菌种：以冷冻保藏为主，用于菌种的长期保存，一燉是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的标准菌株，用符号S表示。一•般可保存5年。②传代用菌种：采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，用于菌种的传代，用符号G表示。甘汕冷冻管保藏法一般可保存2年；③工作菌种：保存于半固体内或琼脂斜而培养基中，作为工作用菌种，用符号W表示。一•般可保存1〜2个刀。4.3.2菌种的接

4、收菌种购到实验室后，应在菌种接收记录上填写所购菌种的信息，如名称、数量和接收口期等。如果不是立即使用应按照使用说明要求储存好菌株，马上使用的应该经过复活和按照上述的储存方法贴好标签后储存。4.3.3冷冻干燥菌种的恢复培养按菌种保藏中心的要求进行恢复培养。屮国普通微生物菌种保藏管理屮心(CGMCC)建议的方法如下：①安瓶管开封：用浸过70%酒精的脱脂棉擦净安瓶管，川火焰将安瓶管顶端加热，滴无菌水至加热的安瓶管顶端使玻璃开裂，用锂刀或银子敲下已开裂的安瓶管的顶端。②菌株恢复培养：用无菌吸管，吸取0.3-0.4ml适宜的液体培养基(如

5、营养肉汤)，滴入安甑管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，取约0.2ml菌体悬浮液，移植于指定的琼脂斜面/平板培养棊上，剩余的菌液，注入指定的液体培养基内（3-4ml）,然后在建议的温度下（一•般培养温度32.5°Cd2.5°C,18〜24h）培养。①注意事项：菌种活化前，请将安甑管保存在5-10°C的坏境2某些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。4.3.4菌种的传代从菌种保存小心获得的冷冻T燥菌种为第0代。按转种次数确定菌种的代数：①冷冻干燥的菌种在液体培养基内恢复培养（第1代）后，转种至平板

6、培养基上得到单个纯菌落，此为第2代。菌种传代一般不超过5代。②鉴定菌种示制甘汕冷冻管经菌种特性鉴定示，挑取平板上纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，此作为第2代传代用菌种（G2）；同时挑収纯菌落转接斜而，此菌种作为工作用菌种,为第3代（W3）。③将笫2代传代用菌种（G2）管冷冻保存（-30°C以下），将笫3代工作用菌种（W3）以适当温度卜-培养适当时间后可用于实验。④取一支冷冻保存的第2代传代用菌种（G2）转种于平板和斜血培养基上，平板上的菌种制成甘油冷冻管，为第3代传代用菌种（G3）；斜而培养基经适当温度下培养适当吋间后可用

7、作第3代工作用菌种（W3）。⑤当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代T作用菌种转接下一代工作用菌种，如W3可直接转接为W4o⑥按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓶，再重复上述操作程序保藏和使用菌种。4.3.5菌种的保存方法4.3.5.1甘油冷冻管保存法甘汕冷冻管保存法适用于保存传代用菌种，一般可保存2年。①将待保存用菌种接种至平板或琼脂斜而，经37°C24〜48h培养后，用无菌接种坏轻轻刮収菌苔，移至预先装有无菌蒸饰水的试管中，调整菌液浓度，使其等同于1单位麦氏比浊管。②向己制备好的菌悬液小加入等体积，浓度为2

8、0%的无菌廿汕，得到10%廿汕菌悬液。③轻轻振摇，使10%甘汕菌悬液充分混合，分装于无菌小试管中，在・30°C条件下贮存。4.3.5.2液体石蜡覆盖保藏法液体石蜡覆盖保藏法适用于保存传代用菌种，一般可保存3-6个月。①取纯化菌种穿刺接种于半固体培养基屮，经37°