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《hcn1通道基因敲除下调小鼠膀胱cajal间质细胞中bk通道的表达及功能》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、DOI：10.16016/j.1000-5404.201501226201501226论著HCN1通道基因敲除下调小鼠膀胱Cajal间质细胞中BK通道的表达及功能孙碧韶1，刘骞2，朱景振1，龙洲2，冯观贵2，李龙坤2，宋波1（40038重庆，第三军医大学西南医院泌尿外科1；40037重庆，第三军医大学新桥医院泌尿外科2）[摘要]目的观察小鼠膀胱的HCN1通道基因敲除对其Cajal间质细胞（interstitialcellsofCajal,ICCs）中BK通道的表达和功能的影响，探讨这种影响对膀胱兴奋性调控的意义。方法健康清洁成年的野生型C57BL/6J小鼠和膀胱HCN1通道基因敲除的C57B
2、L/6J小鼠各48只（雌雄各半）分别记为正常组和敲基因组，反转录PCR（RT-PCR）、荧光定量PCR（Q-PCR）、Westernblot和免疫荧光双标检测其膀胱ICCs中BK通道各亚基的表达变化，离体逼尿肌肌条实验检测加入BK通道阻滞剂IBTX前后肌条收缩的变化，激光共聚焦显微镜下检测分别加入BK通道激动剂NS1619、阻滞剂IBTX前后小鼠膀胱ICCs内钙荧光的变化。结果Q-PCR显示敲基因组小鼠膀胱中BK通道α、β1、β2、β3、β4各亚基表达均降低（P﹤0.01）；Westernblot显示敲基因组小鼠膀胱中BK通道α、β1、β2、β3、β4亚基表达均降低（其中α、β3、β4：P﹤
3、0.01；β1、β2：P﹤0.05）；免疫荧光双标显示敲基因组小鼠膀胱ICCs中BK通道α亚基表达降低（P﹤0.01）；离体逼尿肌肌条实验显示加入IBTX后敲基因组和正常组肌条收缩幅度均变大（P﹤0.01，P﹤0.05），且敲基因组肌条收缩幅度的变化值小于正常组（P﹤0.05）；激光共聚焦显微镜下可见加入NS1619后两组ICCs内钙荧光均降低（P﹤0.05）、加入IBTX后两组ICCs内钙荧光均增强（P﹤0.01），且不论加入激动剂或阻滞剂，敲基因组加药前后ICCs内钙荧光的变化值均小于正常组（P﹤0.01）。结论小鼠膀胱HCN1通道基因敲除下调了其ICCs中BK通道的表达及功能，这种下调
4、可能是对HCN1通道基因敲除后膀胱收缩减弱的一种代偿。[关键词]ICCs；超极化激活环核苷酸门控阳离子通道；大电导钙激活钾通道；小鼠，基因敲除；膀胱[中图法分类号]R322.62；R329.25；R334.3[文献标识码]AKnockoutofHCN1ChannelsDown-regulatestheExpressionandFunctionofBKChannelsinInterstitialCellsofCajalinMouseUrinaryBladderSunBishao1,LiuQian2,ZhuJingzhen1,LongZhou2,FengGuangui2,LiLongkun2,S
5、ongBo1(1.DepartmentofUrology,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038,China;2.DepartmentofUrology,XinqiaoHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400037,China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectsofknockoutofHCN1channelsinbladderontheexpressionandfunctionofBKc
6、hannelsininterstitialcellsofCajal(ICCs)inmousebladder,anddiscussthesignificanceoftheseeffectstotheexcitatoryregulationofbladderpreliminary.MethodsFortyeightadultwildtype(HCN1WT)C57BL/6JmiceandfortyeightadultHCN1channelsknockout(HCN1KO)C57BL/6Jmicewereusedinthisstudy.TheexpressionofBKchannelsinICCsw
7、asdetectedinmRNAandproteinlevelsbyRT-PCR,Q-PCR,Westernblotandimmunofluorescencestaining.TheinhibitorandagonistofBKchannels,IBTXandNS1619,wereusedtodetectthefunctionalterationofBKchannelsinICCsofmousebladder
