hbmp2和hvegf165双基因修饰组织工程骨的构建及检测

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1、hBMP2和hVEGF165双基因修饰组织工程骨的构建及检测范伟，张弓（重庆医科大学附属第一医院骨科，重庆400016）【摘要】目的：构建hBMP2和hVEGF165双基因修饰的组织工程骨并检测其基因表达情况。方法：构建pEGFP/hVEGF165和pEGFP/hBMP2两种真核表达质粒，并用阳离子脂质体法转染至兔成骨细胞，再以脱蛋白骨（DPB）为支架，体外构建多基因修饰的组织工程骨，同时采用RT-PCR和WesternBlot对组织工程骨中hVEGF165和hBMP2基因的表达情况进行检测。结果：转染hBMP2

2、和hVEGF165的成骨细胞可以在DPB上贴附生长，并且两种基因的体外表达时间可持续3周左右。结论：成功构建hBMP2和hVEGF165双基因修饰组织工程骨，并且能有效表达hBMP2和hVEFGF165基因，为进一步观察其在体内的再血管化和成骨活性，用于大段骨缺损修复奠定了实验基础。【关键词】组织工程骨，血管内皮细胞生长因子，骨形态发生蛋白，基因表达Constructionanddetectionofdual-gene-modifiedtissueengineeringbonewiththehBMP2andhVE

3、GF165FANWei，ZHANG-Gong（DepartmentofOrthopaedics,theFirstAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversityChongqing，400016）[Abstract]Objective:Constructionofdual-gene-modifiedtissueengineeringwithhBMP2andhVEGF165，anddetectionthegeneexpressionofhVEGF165andhBMP2.Met

4、hod:Thisexperimentistoconstructtwokindofeukaryoticexpressionplasmid,pEGFP/hBMP2andpEGFP/VEGF165,whichwerebothtransfectedintoosteoblasts,andthenbuildadual-gene-modifiedtissueengineeringboneinvitrowiththeDeproteinatedBone,DPB,astheframe.Athesametime,wedetectedt

5、hegeneexpressionofhVEGF165andhBMP2withRT-PCRandWesternblot.Results:OsteoblaststransfectedeukaryoticexpressionplasmidsofpEGFP/hBMP2andpEGFP/VEGF165couldbegrowthedinDPB,andboththehBMP2andhVEGF165couldcontinuetoexpressthreeweeks.Conclusion:ThehVEGF165andhBMP2dua

6、l-gene-modifiedtissueengineeringbonewereconstructedsuccessfully,thegenesofhVEGF165andhBMP2couldbeeffectiveexpressedinthistissueengineeringbone,thuslayinganexperimentalfoundationforfurtherobservationofitsrevascularizationandboneformationinvivoandfortherepairof

7、largebonedefect.【Keywords】Osteoblasts，TissuEngineering Bone，VEGF，BMP，GeneExpression骨骼组织因创伤、肿瘤、退行性改变等造成的骨缺损在临床中十分常见，对缺损的修复主要采用骨移植的方法进行治疗。现有治疗手段均存在某些缺陷，组织工程学技术为骨缺损修复提供了新的途径。脱蛋白骨（deproteinatedbone，DPB）具有天然网状孔隙系统，原骨盐支架的三维结构，其组成及结构符合生理要求，具有良好的组织相容性，有利于细胞的粘附生长与分化。本

8、实验通过构建hBMP2和hVEGF16基因修饰的组织工程骨，为进一步观察其在体内的再血管化和成骨活性，用于大段骨缺损修复奠定了实验基础。1材料与方法1.1.主要材料质粒pIRES2-EGFP-hBMP2及pET22b-hVEGF165均由华中农业大学白培胜博士惠赠。pEGFP-C1表达载体及大肠杆菌DH5α由重庆医科大学临床检验诊断学实验室保存。健康成年新西兰大白兔，雌雄