医学毕业论文ebna2基因真核表达载体的构建及表达产物的功能

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1、XX大学毕业论文EBNA2基因真核表达载体的构建及表达产物的功能姓名：2014年6月25日【关键词】EBNA2ConstructionofeukaryoticexpressionvectorofEBNA2andfunctionaldetectionofitsproduct【Abstract]AIM:ToconstructtheeukaryoticexpressionvectorofEBNA2andtoexpressitineukaryoticcellsanddetectthefunctionofitspr

2、oduct.METHODS:EBNA2genewasobtainedbyPCRandDNArecombinationfromtheplasmidpSG5EBNA2.PCRproductofEBNA2bwastheninsertedintoplasmidpMD18Tandsequenced.ThefulllengthEBNA2genewascutandinsertedintoeukaryoticexpressionplasmidpCMVHA・UsingLipofectamineTM2000,theplasm

3、idpCMVEBNA2wastransfectedintoCos7andthendetectedbyWesternblotandimmunofluorescence・TheactivityofEBNA2wasdetectedbyluciferasereporterassay.RESULTS:TheEBNA2genewassuccessfullyclonedanditssequencewasidenticaltothatinGenBank.AfterplasmidpCMVEBNA2wastransfecte

4、dintoCos7,theexpressedproductofEBNA2wasdetectedbyWesternblotandimmunofluorescence.ThetranscriptionalactivityofEBNA2wasdemonstratedbyreporterassay.CONCLUSION:TheeukaryoticexpressionvectorpCMVEBNA2hasbeensuccessfullyconstructedandsuccessfullyexpressedineuka

5、ryoticcellline.TheEBNA2proteinhastranscriptionalactivation.[Keywords]EBNA2;clone;expression;geneticvector【摘要】目的：构建EB病毒核心抗原2(EBNA2)的真核表达载体，在真核细胞中表达，并检测其表达产物的功能•方法：应用DNA重组和PCR方法从质粒pSG5EBNA2中亚克隆EBNA2的编码基因，插入到真核表达载体pCMVHA中.应用脂质体的方法将重组质粒pCMVEBNA2瞬时转染Cos7细胞，通过W

6、esternblot和免疫荧光方法检测EBNA2的表达.应用荧光素酶报告实验检测EBNA2蛋白的活性.结果：克隆EBNA2的编码基因，经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致.以含有EBNA2编码基因的真核表达载体瞬时转染Cos7细胞，EBNA2基因的表达产物通过Westernblot和免疫荧光方法得到证实.荧光素酶报告实验显示所表达的蛋白具有转录激活活性.结论:成功构建EBNA2的真核表达载体，证实其在真核细胞Cos7可以表达，并具有转录激活功能.【关键词】EBNA2基因；克隆；表达；遗传载体0引

7、言EB病毒核心抗原2(EBNA2)的编码产物是EB病毒体外感染细胞时最先表达的蛋白，作为一种转录因子，它可以调节病毒及细胞内多种基因表达，如LMP1,LMP2A[1],CD21,CD23及cmyc等，同时还可以抑制细胞免疫球蛋白重链的转录.Notch信号途径是体内一个非常保守的信号途径，在体内分布十分广泛[2].EBNA2可以与Notch信号途径中的重要分子RBPJk相结合，激活下游靶基因，并通过模仿Notch信号途径对体内淋巴细胞的分化和发育方向起调控作用[3]・同吋EBNA2还可以促进抑癌分子p53的

8、磷酸化[4],调节癌基因的表达.我们对EBNA2基因进行了克隆，并在真核细胞中表达，为进一步探讨其对小鼠免疫系统发育过程的影响奠定基础.1材料和方法1.1材料大肠杆菌XL10；质粒载体pCMVHA,pBluscript(-),pGA9816为本室保存.载体pMD18T购自TaKaRa公司.Cos7细胞为本室保存.脂质体LipofcctamincTM2000及细胞培养试剂均购自Invitrogcnc公司.抗EBNA2抗体购自Da