烟草组织培养综合实验报告

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1、烟草组织培养实验论文Experimentalstudyontissuecultureoftobacco报告题目烟草组织培养作者姓名肖贝班级学号1203班2012114010304指导教师王友如完成时间2015.9.20牛物学实验教学烟草组织培养的研究肖贝（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院生物1203班湖北黄石435002）摘要：烟草组织培养作为植物组织培养的常用植物，该实验通过对消毒的烟草种子先进性初代培养，接着取其外植体进行继代培养的研究，来改进现有的组织培养技术，为组织培养的应用打下好的基础。关键词：烟草，

2、组织培养，继代培养引言11材料与方法11.1材料11.1.1实验材料11.1.2仪器设备11」・3试剂及溶液21.2方法3121烟草无菌苗的培养31.2.2反分化培养31.2.3继代培养41.2.4生根培养41.2.5组培苗的移栽驯化42结果与分析42」烟草无菌苗的培养42.2反分化培养42.3继代培养52.4生根培养53讨论参考文献5致谢6烟草组织培养的研究肖贝（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院湖北黄石435002）引言组织培养是最基础的生物技术，它不仅是一种植物快速繁殖的手段，同时也是植物改良、种质保存和次

3、生物质生产的理想途径。它的全而应用已使农业的生产走向集约化和工业化⑴。烟草是植物组织培养的常用植物，冇关烟草组织和细胞培养已有不少报道近年来在抗性研究、基因转化和次生物质生产等方面也取得一些进展。植物组织培养也就是所谓的植物克隆，简单的说就是提取植物的根茎叶芽或一个细胞，通过生物技术手段，在很短的时间内诱导分化出与母体完全相同的植物。植物的组织培养是一种无性繁殖，具有用材经济，生产周期短，繁殖系统大，培育无病毒苗，可获得新的突变体，降低成本提高工作效率的特点，还能保持亲木的优良性状，它是植物基因工程的重要组成部分，是植物基

4、因工程研究的一项重耍技术手段〔2〕。1材料与方法1.1材料1.1.1实验材料烟草种子1.1.2仪器设备一、常用仪器1.蒸憾水器1.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅2.分析天平（AB204-N型，梅特勒■托利多仪器上海有限公司）3.超净工作台4.电热干燥箱烘箱（WMK・02型，武汉电控仪器厂）6.恒温光照培养箱7.电冰箱&显微镜和解剖镜9.旋转培养机10.离心机11.酸度测定仪：⑴精密PH4-7试纸；⑵笔型袖珍酸度计。二、必要的器皿（-）玻璃器皿1.培养器皿①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③培养皿2.盛装器血①试剂瓶②烧杯3.计量

5、器皿①量筒②容量瓶③吸管4.其它器IIIL滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。（-）金属器械1.蹑子2.解剖刀3.剪刀类4.接种针1.1.3试剂及溶液一、试剂（-）用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。（二）洗涤剂1.2HC1酒精:95%酒精100ml加入2mlHCl2.硫酸一重钻酸钾洗液称取10g重銘酸钾加入蒸憾水90ml,加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml,放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等还原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重辂酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗

6、液变绿，失去洗涤作用）。这些器皿必须用口来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。（三）1摩尔浓度（mg/L）NaOH和1摩尔浓度（mg/L）HC1二、培养基1.MS培养基母液配制（单位：毫克mg）2.分化培养基（BA培养基）3.生根培养基（简称NAA培养基）MS0+6-BA（lmg/ml）+NAA（0.1mg/ml）+3%蔗糖+0.6%琼脂（PH5.8〜6.0）1.2方法1.2.1烟草无菌苗的培养烟草种子用70%酒精浸泡60s,然后用1・5%次氯酸钠表面消毒15-20min（晃荡），无菌水洗3遍后接种在大量元素减半的MS基木培养基上

7、。1.2.2反分化培养烟草培养2〜3个月后，从无菌苗上取叶片，然后用锋利的手术刀片将叶片切成0.5cm见方的小块，置于反分化培养基（BA培养基）中。1.2.3继代培养每隔14天左右将烟草叶片置于继代培养基（BA培养基）屮继续培养。观察愈伤组织生长情况。1.2.4生根培养待愈伤组织生长烟草长出茎、叶后，将茎叶部分切下，置于生根培养基中（NAA培养基），直至其长出根部。1.2.5组培苗的移栽驯化将生根的烟草组培苗从培养室取出，放在自然条件下1—2天，然后打开瓶口，再放置1一2天后移栽至室外。2结果与分析2.1烟草无菌苗的培养经

8、过二个刀的培养，烟草种子＜成一颗烟草，烟草没有被污染且长势很好。说明用烟草种子培育烟草无菌苗成功。2.2反分化培养将叶片切段接种到培养基屮培养，5天后外植体开始膨胀，再继续培养5天，切块膨胀成圆拱型，继续培养，切片周围开始有浅绿色半透明的愈伤组织形成。图1愈伤组织2.3继代培养愈伤组织经继代培养后，慢慢