细胞工程实验讲义

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1、细胞工程实验讲义哈尔滨商业大学食品工程学院生物工程专业实验一番茄的胚轴、子叶培养一、实验目的愈伤组织的诱导和止确地运用激素诱导形态建成是植物组织培养中最常用的基本技术，通过实验使学生们了解这一操作过程的要点与技能，及快速繁殖的技术过程。二、实验原理高等植物细胞具有全能性，在高等植物细胞分化过程中，即使是高度分化的植物细胞，它们的遗传潜能并没有丧失，仍保持着潜在的全能性。已分化成熟的活细胞在一定的营养因素作用下，有可能恢复遗传全能性，类似合子的发育功能，由单细胞发育成胚装体，继而形成完整的植株。在植物组织培养中，激素在愈伤组织的形成及形态建成中起着重要作用。在一定的范围

2、内，生长素/激素的比例高时，产生根，反之则产生芽。通过变换激素的种类和浓度，能有效地调节培养组织的器官分化。二、实验用品（一）、器材超净工作台、培养箱、工形镀子、解剖剪刀、三角瓶、培养皿、滤纸、酒精灯、脱脂棉、烧杯、量筒、封口膜、振荡培养膜、（二）、试剂MS基本培养基、次氯酸钠、IAA、BA、蔗糖、乙醇、去离子水、1mol/LHCL、1mol/LNaOH（三）、材料“美国大红”番茄种子三、实验准备——培养基配制在植物组织培养使用的培养基中，涉及的药品较多，而且许多微量元素在配制培养基时不能直接称取，故为了方便培养基的配制以及减少微量元素的称量误差，常常在配制培养基前先

3、配制培养基的母液。植物组织培养基的母液分为大量元素母液、微量元素母液、维生素母液和各种激素母液等。1、MS培养基母液配制成分1X20X(1)、大量元素mg/Lg/LNH4N03165033KN03190038CaCI2.2H204408.8（无水6.64）MgS04.7H203707.4KII2P041703.4(2)、微量元素IX100XKI0.8383mgH3B036.2620mgMnS04.2H2015.61560mgZnS04.7II208.6860mgCuS04.5H200.025250mgCoC12.6H200.025250mgNa2MnO4.2H200.

4、2525mg(3)、铁盐200XFeS04.7H205.57gNa2EDTA.2H207.45g(4)、有机IX100X肌醇100lOOOOmg烟酸0.550mg甘氨酸2200mg维生素B10.440mg维生素B20.550mg注：配制铁盐溶液时，将二种纱品分别置于450ml的蒸憾水中，加热并不断搅拌，使之溶解，然后将二种溶液混合，把PH值调到5.5O最后加重蒸懾水定容到最终容积1000mIo每升培养基取5ml(5ml/L)o2、MS培养基的配制1000mI培养基取大量元素(20X)50ml1000ml培养基取微量元素(100X)10ml1000ml培养基取有机(10

5、0X)10ml1000ml培养基取铁盐(200X)5ml1000ml培养基加蔗糖30g1000ml培养基加琼脂粉8-10g加蔗糖、琼脂粉、定容到1000ml,用NaOH或lmol/LHCL调PH值为5.8。加热培养基，并分装于三角瓶(100ml的三角瓶装25-30ml培养基）中在120°C、0.IMpa高压灭菌锅灭菌15min备用。3、愈伤组织诱导培养基MS基本培养基+0.2mg/LIAA+2mg/LBA+蔗糖+琼脂，调PH值到5.8。加热培养基，并分装于培养皿中,每JHL20ml培养基，灭菌15min备用。四、实验方法与步骤（一）、发无菌苗1、种子消毒取番茄种子于5

6、0ml小烧杯中用70%乙醇中消毒0.5-1min,倒去乙醇，用滤纸吸干。用无菌水冲洗3-4遍，弃去无菌水，用滤纸吸干。再以10%次氯酸钠表面消毒8-12min,用滤纸吸干。然后用无菌水冲洗4-5遍，于28°C无菌水浸泡24h。2、接种将浸泡好的番茄种子，用滤纸吸干，用工形银子接种于培养基上,每个100ml三角瓶接20粒种子。3、培养无菌苗将接种的蒂茄种子与25-28°C下培养，4-5天后，无菌苗长到三角瓶的瓶颈处。（二）、诱导愈伤组织1、制备外植体：取番茄无菌苗，用解剖剪刀将无菌幼苗及胚轴剪成0.5cm左右的若干段，形成外植体。2、接种：用工形锻子将外植体接种到愈伤组

7、织诱导培养基上，每个培养皿接20块。3、培养：将接种的材料置于培养室中，25°C下培养。3-4天后,在外植体的四周和上表面将形成愈伤组织。记录愈伤组织出现的时间。五、实验结果将实验结果填入下表。表愈伤组织诱导率及污染率统计表取材部位接种外植体数愈伤组织形成时间愈伤组织诱导率(％)外植体完全长成愈伤组织率(%)污染率(%)幼叶胚轴六、思考题统计污染率，找出导致污染的可能原因。实验三小麦成熟胚的培养一、实验目的通过实验，使学生进一步掌握组织培养的基本操作程序，并了解植物胚胎培养的技术关键。二、实验原理与其他类群的植物不同，被子植物的受精过程是双受精（do