浙大生化实验四

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1、专业：牛:物科注姓名：用沪必学实验报告学号:日期：2013-10-22地点：生物实验中心308课程名称：生物化学实验（甲）指导老师:成绩：实验名称：酶的革木性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度实验类型:生化实验同组学生姓名：一、实验冃的和要求（必填）三、实验材料与试剂（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）七、实验结果与分析（必填）二、实验内容和原理（必填）四、实验器材与仪器（必填）六、实验数据记录和处理八、讨论、心得I•酶的基本性质底物专一性一、目的要求1.了解酶的专一性。2.掌握验证酶的专一性的基木原理及

2、方法。3.学会排除干扰因索，设计酶学实验。二、基本原理腮是-•种貝有催化功能的蛋口质。腮蛋匚I结构决定了腮的功能一一腮的高效性，酶催化的反应（陆促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103〜1017倍。酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列儿种:1•相对专一性一种酶能够催化一类具冇相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2•绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用

3、于任何其他物质。如腺酶只能催化尿索进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它戏糖，淀粉醜只作用于淀粉,而不作用于纤维素。3•立体异构专一性有些酶只有作川于底物的立体异构物屮的一种，而对另一种则全无作川。如酵母屮的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一•性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与述原性糖的半缩醛疑基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。Na2

4、CO3+2H2O2NaOH+H2CO3CuSO4+2NaOH►Cu（OH）2+Na2SO4述原糖（―CHOor—C=O）+2Cu（OH）2Cu2O1（砖红色或黃色）+2H2O+糖的氧化产物在分了结构上，淀粉几乎没有，而蔗糖全无半缩醛基，它们均无还原性，因此它们与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉齣水解，产物为葡萄糖；蔗糖被蔗糖晦水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有口由半缩醛轻棊的还原糖，与BenedictU剂共热，即产生红棕色C^O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酚、蔗糖酚对淀粉和蔗糖的水解作用。三、实验材

5、料与试剂1、实验材料（1）蔗糖酶液（样品IV）;⑵新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；2、实验试剂（1）蔗糖酶液蔗糖酶液（样品IV），使用浓度可参考“实验四蔗糖酶的酶活力测定”实验的情况来选择酶的稀释倍数（加蒸傳水稀释），备用;⑵唾液淀粉酶液（学牛白制）取（）.5mL唾液至5（）ml量筒屮，用蒸馆水（稀解）到50ml,用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异,可稀释50〜400倍，甚至更高；⑶5%蔗糖（A.R.）溶液；⑷0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；⑸Benedict试剂；四、实验器材与仪器L漏斗，2.脱脂棉花；3.恒温水浴

6、（37°C,100°C）；4.量筒；5.试管及试管架；6.烧杯；7.吸量管。五、实验操作方法和步骤㈠检查试剂取3支试管，按下表操作：试剂处理试管编号1230.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液(ml)35%蔗糖溶液(ml)3蒸锚水(ml)3Benedict试剂(ml)222摇匀，置沸水浴煮沸2〜3min记录观察结果注：①查目的：试剂是否有干扰因索存在。㈡淀粉酶的专一性取三支试管，按下表操作：试剂处理试管编号1230.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液(ml)35%蔗耕溶液(ml)3蒸傳水(ml)3唾液淀粉酚液(ml)111

7、摇匀，置379水浴保温lOminBenedict试剂(ml)222摇匀，置沸水浴煮2~3min记录观察结杲㈢蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作:试刑处理试管编号1230.5%淀粉(0.3%ZaCl)溶液(ml)35%蔗糖溶液(nil)3蒸锢水(ml)3蔗箱酶液（样AA1V）(ml)111摇匀，宣379水浴保温lOminBenedict试剂(ml)222摇匀，宜沸水浴煮2-Ymin记录观察结果II.影响酶活性的因素——激活剂和抑制剂一、目的要求1.了解激活剂和抑制剂对酶促反丿'、'/速度的影响。2•学习检定激活剂和抑制

8、剂彩响酶促反应速度的原理和方法。二、基本原理在陆促反应过程中，腮的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中心上的一些基团）发生变化，因而引起酶活力下降，其至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。酶的激活剂种类：1、—些简单的无机