实验报告(硫酸铵法-实验报告例)

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1、《生物技术制药概论》综合性实验“动植物超氧化物歧化酶SOD的制备”背景介绍：超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)“J能与机体衰老、肿瘤发牛、自身免疫疾病和辐射防护有关，是一种重要的蛋白质类药物，可用于炎症、类风湿关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症等。SOD存在于动、植物、微生物中，冇Cu-Zn-SOD,Mn-SOD,Fe-SOD等多种形式存在。植物SOD的研究今年来引起了科学家的特别重视，因为SOD具有清除体内过量的超氧自山基(Of)的功能，対于预防衰老、血管硬化等有显著效果，对疾病的治疗也初步显出疗效；植物来源的SOD稳定性较动物来源的好,

2、特别是类・SOD,因相对分了量较小，易透性好，引起保健品、美容品方面的特别重视。比较好用的品种有刺梨、茶叶等植物的SOD。此外，植物SOD酶在农业新品种培育研究小也有重要意义。该综合性实验涉及木科程动物细胞制约、植物细胞制药及酶工程制约。实验过程综合了药物制备的重要步骤，如：收集、植物干粉制备、丙酮抽捉、清洗、溶血、去血红蛋口、沉淀、热处理、分离、透析浓缩、蛋片质类药物的纯化技术、酶类药物的活性测定等。一、实验目的通过本实验学习，使学生掌握牛物技术制药的重要章节：动物细胞制药、植物细胞制药、酶工程制药，提高学牛运用知识、对理论知识的应用等综合能力。二、实验原理将动植物材料用不同

3、的方法进行细胞破裂后用缓冲液浮洗，再用乙醇、氯仿去除杂质沉淀，在硫酸钱、丙酗作用下使SOD沉淀；最后进行溶解，并用透析、柱层析(DEAE-SephadexA50;SephadexG-100;DEAE-cellulose)的方法进一步纯化，得到SOD纯品。三、实验步骤3.1实验材料：新鲜桑叶、硫酸谡、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠3.2实验步骤：新鲜桑叶［制干粉］丙酮［提取］桑叶丙酮干粉>上清液磷酸钾缓冲液I—丙［沉淀酶］酗［透析，浓缩］1［柱层析］活性组分SephadexG-100梯度DEAE-Cellulose洗［离子交换］脱浓缩酶液超滤浓缩PH7.8磷酸钾缓冲液SOD纯品桑叶SOD

4、制备的技术路线A、粗提（1）桑叶T大量清水洗涤T-净一＞蒸係水洗涤一＞滤纸吸干称50g-＞研磨机研磨T过滤一＞上清液-测定体积（V1）（2）上清液-＞60°C水浴20min（去杂蛋白）-＞10000r/min冷冻离心20min-＞上清液一＞测定体积（V2）B、纯化（硫酸铁分级沉淀法）按A的体积查岀0C达到一淀饱和度需加入的硫酸钱的质量50%饱和度I上清液I90%饱和度I沉淀10000r/min20min4°C10000r/min2h20min4°C30minsolutionblankcontrolsamplePH8.3PBS4.7ml4.7ml4.5mlHC110glSODsa

5、mple0.2ml邻苯=酚50mmol/LlOpL10gLV总4.7ml4.7ml4.7ml5mmol/LPH7.8PBSC、按表中试剂用量加入试管并在25°C保温25mino注：缓冲溶剂的配置根据附表的相关浓度进行D、活力测定:将样品溶液倾入1cm的比色杯中，在325nm处每隔30s测定吸光度1次，选择吋间范围,控制对照管每分钟吸光度的变化速率在0.070左右，记录样品溶液每分钟'。E、酶活力的计算：SOD活力（U-mg-1）=（0.070-AA325）x100%xV总-0.070x50%-V定义・V样。其中:V总代表反应总体积，V样代表加入样品液的体积，V定义代表活力单位定

6、义体积（1ml）o四、实验数据和实验结果1、称取桑叶重量：50.1246gVI：40.80ml0.711倍V2：未测出未测出即可根据测岀值计算AA325即可根据测出值计算AA3252、粗提过程：（1）实际加入缓冲液体积：70ml（2）分别稀释倍数：（3）测定前再稀释倍数：耒知3、酶活力测定获得两组数据：①xlx2x3x4（未测岀）②xlx2x3x4（未测出）③将以上数据带入公式：SOD活力(U-mg-1)=(0.070-AA325)xlOO%xV总一0.070x50%-V定义・V样，即可得到桑叶中SOD的酶活力。五、实验结论及心得(-)实验结论1、木次实验由于实验仪器的故障问题

7、(离心机破损)导致实验最终无法顺利完成，只能完成实验的前半部分，因此无法测定出桑叶中超氧化物歧化酶SOD的活力；2、棊本获得的数据：包括：桑叶称重:50.1246g：VI：40.80ml3、实验虽然没有得岀最终的结果，但是通过此次实验的进行，我们了解到了超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)可能与机体衰老、肿瘤发生、自身免疫疾病和辐射防护冇关，是一种重要的蛋白质类药物，可用于炎症、类风湿关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症等的重要作用，以后有机会会对其进行更加