实验--微生物

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1、实验一微生物培养基的配制和灭菌及空气中微生物的认识一•实验目的：1、明确培养基配制的基木原理；2、掌握培养基配制的一般方法和步骤；3、了解高压蒸汽灭菌的基木原理和操作方法;4、认识微生物存在的普遍性。二•实验原理:培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由丁不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。培养基的种类繁多，根据培养基的成

2、分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表而和内部一切微生物营养体、芽砲和抱子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。常用加热灭菌法：1^干热灭菌：用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2、湿热灭菌⑴高压蒸汽灭菌法⑵间歇灭菌法⑶煮沸消毒法三、实验材料每组同学需要准备以下材料（14人/组）：•小试管：21支（15*150mm）•培养皿：60套（4）9cm）•移液管：15支（1000ml）＞1支（10

3、1）•三角玻璃棒：2支•瓷缸：「个（1000ml）•三角瓶：3个（500ml）、1个（250ml）、2个（100ml）•量筒：1个（100ml）•玻棒：1支•分液漏斗：1套•药匙：2把•标签贴纸：1张•记号笔：1支四、实验步羽培养基的制备过程称量…溶解•…调节pH值…•过滤•…分装及包扎…•灭菌•…灭菌后试管摆放斜面1•称量按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。@配方：牛肉膏5g蛋白腺10gNaCI5g蒸憾水1000ml琼脂20g（另称于三角瓶中）@2NNaOH配制：1•量取80ml去离了水置于100-

4、200ml塑料杯中。2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3•待NaOH完全溶解后，用去离了水将溶液定容至于100mlo4•将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。@2.5NHCL配制：1.在78.4ml的去离了水中加入21.6ml的浓盐酸，均匀混合。2.室温保存。2•溶解向上述瓷缸屮加入所需要的水量，搅拌使其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程屮，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。3•调节pH值用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和盐酸调节

5、PH。4•过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。5•分装及包扎根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。6•无菌水的制备无菌水为下一次微生物分离实验屮所需要的材料。250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），分别装自来水90mL和1OOmL,塞上棉塞，包扎、灭菌备用。7•灭菌：高压蒸汽灭菌，121°C灭菌30分钟。@操作过程@加水T装锅T盖盖T加热T当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气9正式升压T保压（l.lkg/cm2,121

6、°C,保持20-30min）T停止加热9自然降压至零T排放余汽T开盖T取出灭菌物品9趁热摆斜面9检验灭菌效果。8.灭菌后试管摆放斜面当培养基冷却至50°C左右时，将试管带棉塞的一端搁在一•根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。注意事项1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2、蛋白月东极易吸湿，称取时动作要迅速；2、配制固体培养基时，先将其他•药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入,继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外

7、溢；4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的站，液体培养基的装量约为管高的M，三角瓶的装量不超过瓶体的Ml:5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。B7-29•倒平板的方法将培养基加热融化，待冷却至55-60°C吋，倒平板。每个培养皿中倒入15-20ml，铺平,制成平板。倒好的平板在超净台里吹去冷凝水备用。10•周围环境中微生物的观察⑥在牛肉蛋白腺平板上作如下实验：①用未洗过的手指头在平板是涂抹②用肥皂洗过的手指头（不用毛巾擦）在平板是涂抹（用力-•致）

8、③用I口纸币在培养基上拖动④放置一根头发①打开培养皿置实验台上（空气中）lOmin②按无菌操作要求在酒精灯火焰边打开皿盖lmin③对着培养皿上的培养基咳嗽④稍稍打开嘴唇压在培养基上◎以上用报纸包好倒置37°C培养箱里培养48小时观察结果试管斜面固体200ml本次实验的任务:液体50ml200ml3瓶①准备2瓶无菌水（90ml和150ml各1.瓶）7支试管五、实验结果及分析处理①②③④⑤⑥⑦⑧CK六、实验作业1・牛