感染性疾病的实验室诊断

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1、感染性疾病的实验室诊断感染性疾病的实验室诊断介绍实验室检查可直接对微生物进行检测（如：肉眼观察、利用显微镜观察、病原体在培养基上牛长）或者间接对微生物进行检测（如抗体检测）。一般的检测手段包括•显微镜检查（显微镜检查）•培养（培养）•免疫学试验（凝集反应试验如乳胶凝集试验、酶免疫测定、蛋口质印迹、沉淀试验、补体结合试验）免疫学试验•核酸为基础的鉴定方法（以核酸为基础的鉴定方法）•非核酸鉴定方法（以非核酸为基础的鉴定方法）培养通常是明确微生物的金标准，但是结果可能要在数天或数周后才能得到，并且不是所有的病原体都可以通过培养得到，因此可以选择其他有参

2、考价值的试验。当一种病原体得到培养及鉴定后，实验室就可以评估其对抗微生物药物的敏感性药皱试验。有时也可以用分子生物学的方法來检测特定的耐药基因。一些试验（如革兰染色，常规的需氧培养）可以检岀多种病原体，并且通常在许多可疑的感染性疾病的诊断中被使用。然而由于通过这些试验可能使得一些病原体被遗漏，因此临床医生必须知道对每种可疑病原体检测所用的每个试验的局限性。当出现可能被遗漏的情况时，医生需要对怀疑的病原体进行特异性的检测（如特异染色或特异培养基）或建议实验室选择更多有针对性的试验进行检测。显微镜检查显微镜检查速度快，但是准确性有赖于检测者的经验以及

3、检测设备的质量。除标准的实验室外，由于质控方面的不足常常限制了医牛选择显微镜检查作为确诊的方法。组织的显微镜检查可能需要区分病原微生物来自于侵袭性疾病或仅仅为表而定植一这种区分往往难以由培养来判别。虽然有一些不能被染色的标木要通过水分固定来检出真菌、寄牛虫（包括蠕虫的卵和幼虫）、阴道来源细胞和能动的微生物（如毛滴虫属）、梅毒螺旋体（通过暗视野显微镜），但是大多数标本用染剂处理后都能使病原体带有颜色，让它们在背景中突显出来。为了提高真菌的可分辨度，可用10%氢氧化钾（K0H）溶解周围的组织和非真菌病原体。虽然不被染色也是100%具有特异度的，但是临

4、床医生述是以推测可能的病原体来要求所选用的染剂。大多数样本用革兰染剂染色，如果怀疑是分枝杆菌则要选用抗酸染剂。然而有一些病原体使用这些染剂则不能被轻易观察到；如果怀疑是此类病原体，需要使用不同的染剂或采用其他可以进行鉴定的方法。因为显微镜检查时通常要求标本屮微生物的浓度达到1X104-5/mL,所以许多体液标本（如CSF,尿液）在进行检查前需进行浓缩处理（如离心法）。革兰染色革兰染色是通过细菌能保留紫色晶体染剂（革兰阳性一一蓝色）或不能保留（革兰阴性一一红色）以及细胞的形态学（如杆菌或球菌）和细胞的排列（如：丛状、链状、二倍体）来将细菌分类。可以

5、根据这些特征最终确定抗生素治疗方案。用革兰染色后的形态及染色特征来发现病原微牛物的方法可鉴定出多种细菌感染。革兰染色是将标本通过热固定于载玻片上，相继用革兰紫色晶体、碘、脱色剂和复染剂（具有代表性的是番红精）处理。抗酸染色和改良抗酸染色这些染色法用于鉴定“抗酸”微生物（分枝杆菌类）和“中等抗酸”微生物（主要是放线菌类）。除了用于一些寄生虫的囊合子（如隐抱子虫）夕卜，它们也用于红线菌屈以及和其有关菌屈的染色。分枝杆菌在痰液中的含量达到10000个/ml就能被检测出，但是因为它常常在标本中以更低的浓度水平存在，检测的灵敏度因此受限。通常几毫升的痰液在

6、氧氧化钠去污染后经过离心浓缩才被用于抗酸染色。尽管一些中等抗酸的微生物很难从分枝杆菌中区分出来，但是这种方法的特异度仍较可信。荧光染色这些方法可用于更低浓度的标本（〈1X104细胞数/niL）的检测。具体例子包括叶噪氮葱橙色荧光（细菌和真菌）,金胺-玫瑰红和金胺0荧光（分枝杆菌）,白色含钙荧光（真菌，尤其是皮肤癣菌）。病原菌抗体和荧光剂偶联（直接或间接免疫荧光）理论上可以提高检测的灵敏度和特异度。然而由于这些试验结果的解读和解释有一定的困难，因此商业上仅极少数方法有利用价值而常规使用（如肺砲菌和军团杆菌属直接荧光抗体试验）。印度墨汁（胶态碳）染色

7、这种方法用于检测那些有细胞悬浮的体液（如CSF沉淀物）中主要含有新型隐球菌和其他具有包囊的真菌标本。该方法主要是使背景视野被染色而不是微生物本身被染色，染色后使微牛物的荚膜呈晕轮状而易被观察到。在CSF中其灵敏度不如隐球菌抗原检测。特异度也受到限制：白细胞也可能呈现包囊状。Warthin-Starry银染法和Dieterle染色这些银染色用于显现如螺旋体，幽门螺杆菌（Helicobacterpylori）,微孑包子虫和巴尔通氏体（Bartonellahenselae）（猫抓病的病原）等细菌。赖特染色和吉姆萨染色这两种方法用于检测血液中的寄牛虫，吞

8、噬细胞和组织细胞中的荚膜组织胞浆菌，细胞内由病毒和衣原体所形成的包涵体，耶氏肺范菌的滋养体，以及一些细胞内细菌。三色染色（果莫里-Whe